DNA,并使用贴纸确定DIN评分。使用XGEN CFDNA和FFPE DNA库Prep V2 MC Kit从DNA的25 ng输入中制备示例库,并带有UG库放大套件和自定义IDT索引引物等效于XGEN索引引物,以实现Ultima P1。在图1中,挂毯痕迹(安捷伦)显示了从低质量的FFPE样品中生成的PCR放大库。即使在DIN得分低的情况下也产生了质量库,而没有任何适配器二聚体的证据。表2显示了从UG 100序列上的12 XGEN CFDNA和FFPE库中获得的质量测序指标。图书馆的读取与参考基因组有很高的读数,并且在DIN水平不同的样品中的结果一致。数据显示较低的Indel,不匹配和嵌合体速率以及Q20高的Q20,表明在UG 100系统上生成了质量测序读数。表表示三个重复的平均值。
竖立的福尔马林固定和石蜡包裹的(FFPE)心脏组织来自载体个体是研究死者个体心脏组织的DNA甲基化的重要资源。可能会降低尸检中FFPE组织的DNA质量,从而影响DNA甲基化测量值。因此,估计DNA质量的廉价筛选方法很有价值。研究了使用Illumina Infinium Infinium HD FFPE QC分析(Infinium QC)和Thermo Fisher的Tormo Fisher量化三重量DNA定量试剂盒(分别用探测器量)和Thermo Fisher的量化量(分别概率的DNA限制)(分别概率的DNA甲基化量),研究了(Infinium QC)和Thermo Fisher的量化量(分别对DNA甲基化的量),研究了(Infinium QC)和Thermo Fisher的量化量的DNA心脏组织的DNA质量,并分别进行DNA量化。无甲基化阵列。我们观察到量化剂量降解指数,di和用芝麻分析的可用DNA甲基化数据的量之间存在很高的相关性(r 2 = 0.75; p <10 -11),而观察到较弱的相关性,而Infinium QC和sesame Prome probe dr dr(r 2 = 0.17; p 基于结果,Quantifilertrio di似乎预测了通过线性模型用Illumina Infinium Infinium甲基化阵列和芝麻分析的可用DNA甲基化数据的比例:芝麻探针DR = 0.80 – LOG 10(di)×0.25。基于结果,Quantifilertrio di似乎预测了通过线性模型用Illumina Infinium Infinium甲基化阵列和芝麻分析的可用DNA甲基化数据的比例:芝麻探针DR = 0.80 – LOG 10(di)×0.25。
•使用QIAAMP DNA FFPE组织试剂盒(Qiagen)进行DNA提取。•使用该套件的建议总DNA输入量(适用10 ng或100 ng)对五个样品进行了四种不同的处理,并进行了相关的模板量为1NG。•WGA使用GenomePlex®完整WGA试剂盒(Sigma-Aldrich),Illinea™Ready-Go™Genomiphi™V3(GE Healthcare Life Sciences),Repli-G FFPE Kit(Qiagen)进行。•根据制造商的协议,使用Infinium HD FFPE还原套件(Illumina)进行DNA修复。插入/删除(Indels)可以从福尔马林损坏(FD)样本中提供最有证明的信息,以实现人类识别(HID)目的。结果表明,FD样品的生产力方法可能是使用大量平行测序(MPS)技术利用Indel面板或SNP标记。
目标2:使用475个基因面板评估了分析性能,该基因面板包括在已知等位基因频率下具有广泛临床重要变体(SNV,INDELS和SVS)的FFPE病例中大量已知基因驱动因素。通过对FFPE细胞系颗粒的稀释研究,我们确定SNV的LOD为≥5%突变等位基因频率(MAF),Indels的MAF≥10%,SVS的肿瘤纯度≥20%(表1)。duoseq在跑步和运算符精确研究中均达到了> 98%的可重复性(数据未显示)。内部和LAB间的可重复性,并在可比等位基因频率下对事件进行了高度可重复的检测(表2中的数据)。 这些结果表明,杜塞克能够在实验室之间进行均匀的肿瘤分析。内部和LAB间的可重复性,并在可比等位基因频率下对事件进行了高度可重复的检测(表2中的数据)。这些结果表明,杜塞克能够在实验室之间进行均匀的肿瘤分析。
在这项 RNA-Seq 研究中,11 个匹配的 FF& FFPE 样本中只有 3 个获得了有用的结果
HCO 2.2 ROS1 检测蛋白质表达 检测 ROS 表达 FFPE 载玻片 免疫组织化学染色 Benchmark Ultra /Ultra Plus Ventana Roche / 克隆 D4D6 方案 18 良性、恶性前期和恶性异常 AZ Sint-Jan nvt HCO 2.2 pan-TRK 检测蛋白质表达 检测 pan-TRK 表达 FFPE 载玻片 免疫组织化学染色 Benchmark Ultra /Ultra Plus Ventana Roche/ 克隆 EPR17341 方案 629 良性、恶性前期和恶性异常 AZ Sint-Jan nvt
•提取优化:用1或3小时的孵育提取16个FFPE样品。使用随附的QPCR评估提取的DNA的浓度和质量。•连接研究:测试了缩短的程序,并针对原始条件分析了关键的测序指标,以减少图书馆的准备工作。•较高的吞吐量研究:合并,测序并与8个样本进行了汇总,测序。•变体灵敏度:用Avenio CGP KIT V2对317 FFPE DNA样品进行测序。变体检测与参考方法F1CDX进行了比较。样品包括由QPCR评估的多种DNA质量。测序是在每个样品读取> 60m的Illumina NextSeq序列上进行的。使用FoundationOneⓡ分析平台进行数据分析。结果
图3。HRR途径研究,具有oncomine综合测定法。(a)42 HRR途径基因覆盖在Comcomine综合测定法中。(b)oncomine综合测定以及样本级别LOH估计值(y轴)与在相同的FFPE样品上的正交测试(X轴),Oncoscan测定法(X轴)相关。测试样品集由来自各种固体组织类型的FFPE样品组成。Pearson相关(R)显示为关联度量。(c)比较HRR途径中21个基因的基因级LOH精度(一致性定义为在Oncoscan分析和Comcomine综合测定Plus中具有LOH的21个基因的比例),在克隆样品中具有89%的平均精度为89%)。内部研发数据。
