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宿主范围质粒RSF1010 DNA复制
广泛的宿主质粒RSF1010包含两个相反的启动信号SSIA和SSIB，用于DNA合成，取决于营养DNA复制的起源（ORIV）。如果已删除或倒置SSIA或SSIB，则在低拷贝数中保持了含有工程Orivs的RSF1010微型弹药，将其作为二聚体异常复制，并积聚了在Escherichia coil collewe preats fessefcef101010-Repcepcepcepcepcepc'repc'repc'repc'repc'repc'repc'repc'repc'repc'repc'repc'repc'repc'repc'repc'repc'repc'repc'repc'repc''和Repc'repc'repc''''repc''和Repc。有趣的是，SOG原始酶（质粒Collb-P9的SOG基因产物）的附加细胞内供应与上述所有三个方面相反，这些微播的复制缺乏。对于RSF1010的微型杂粒也是如此，其中SSIA或SSIB被原始体组装位点（PAS）或G4型SSI信号（G位点）代替。此外，对两个相对定向的SSI信号对RSF1010的DNA复制的功能贡献的比较分析表明，无论其类型如何，SSI信号引起了DNA链伸出的启动，从而使Iterons远离Iteron的启动比在ITEREN中的功能更重要。我们认为该功能差异反映了RSF11O DNA复制的启动机械机械的固有特性。
ßA1-晶体蛋白 HDR 质粒 (m): sc-419822-HDR
含有由 CRISPR/Cas9 系统产生的双链断裂 (DSB) 的 DNA 可以通过非同源末端连接 (NHEJ) 或同源定向修复 (HDR) 途径进行修复 (1,2,3)。NHEJ 修复途径在切割位点引入非特异性插入或缺失，而 HDR 途径允许在 DSB 位点进行精确的基因编辑 (1,2,3)。靶向特异性 HDR 质粒为 DSB 提供 DNA 修复模板，当与 CRISPR/Cas9 KO 质粒共转染时，能够在发生 Cas9 诱导的 DNA 切割的位置插入特定的选择标记 (1,2)。HDR 质粒可以整合红色荧光蛋白 (RFP) 基因以直观地确认转染，并整合抗生素抗性基因 (嘌呤霉素) 以选择含有成功 CRISPR/Cas9 双链断裂的细胞。嘌呤霉素抗性和 RFP 编码基因两侧是两个 LoxP 位点，这些位点可被 Cre 载体识别，之后可利用该位点从基因组 DNA 中去除这些选择标记 (4,5)。
ZymoPURE™ II 质粒大量制备试剂盒
2. 加入 150 ml ZymoPURE ™ P2（蓝色），立即轻轻颠倒试管 6 次混匀。不要涡旋！室温下放置 3-5 分钟 3。当溶液呈清澈、紫色且粘稠时，表示细胞完全裂解。 3. 加入 150 ml ZymoPURE ™ P3（黄色），轻轻颠倒试管但彻底混匀。不要涡旋！样品完全变黄后再颠倒试管 5 次。中和完成时，样品将变黄，并形成淡黄色沉淀。 4. 将 ZymoPURE ™ Giga Filter 放在 33 mm 或 45 mm 颈玻璃瓶上，并将裂解物装入 ZymoPURE ™ Giga Filter 中。确保 ZymoPURE ™ Giga Filter 牢固地放在玻璃瓶顶部，等待 10 分钟让沉淀浮到顶部。 5. 将 ZymoPURE ™ Giga 过滤器连接到真空源并打开真空 4 直到回收约 375 ml 澄清的裂解物。保存澄清的裂解物！从千兆过滤器中回收约 375 ml 的裂解物对于下一步至关重要。如果澄清的裂解物体积低于约 375 ml，请参阅附录第 10 页有关调整步骤 6 中使用的 ZymoPURE™ 结合缓冲液体积的信息。
控制CRISPR激活质粒：SC-437275
定期间隔间隔的短质体重复序列（CRISPR）和与CRISPR相关的蛋白质（CAS9）系统是ARCHEA和细菌使用的一种适应性免疫反应防御机制，用于降解前遗传材料。该机制可以用于其他功能，包括用于哺乳动物系统的基因组工程，例如基因敲除（KO）（KO）（1,2）和基因激活（3-6）。CRISPR Activation Plasmid products enable the identification and upregulation of specific genes by utilizing a D10A and N863A deactivated Cas9 (dCas9) nuclease fused to a VP64 acti- vation domain, in conjunction with sgRNA (MS2), a target-specific sgRNA engineered to bind the MS2-P65-HSF1 fusion protein (6).这种协同激活介质（SAM）转录激活系统提供了一个强大的系统，以最大程度地激活内源基因表达（6）。
二氢藻蛋白抑制药物中的质粒转移 -
质粒抗生素抗性基因（ARGS）的共轭转移是ARG传播的重要途径。 据报道，越来越多的抗生素和非抗生素化合物有助于ARG的传播，强调了控制这种水平转移的潜在挑战。 开发阻断或延迟含有ARG质粒转移的共轭抑制剂是控制抗生素耐药性传播的有前途的策略。 尽管这种抑制剂很少见，但它们通常表现出相对较高的毒性和体内效力低，并且它们的作用机制却不足以理解。 在这里，我们研究了一种用于治疗疟疾的青蒿素衍生物（一种用于治疗疟疾）对结合的影响。 dha抑制了埃斯耐里希亚大肠杆菌中超过160倍的体外体外，在小鼠模型中，含有超过160倍的（INCX4质粒）在大肠杆菌中超过160倍（MCR-1）的结合，在体外的体外超过160倍（INCI2质粒）。 它还抑制了带有碳青霉烯电阻基因BLA NDM-5的Incx3质粒的转移，体外超过两倍。 检测细胞内三磷酸（ATP）和质子动力（PMF）以及转录组和代谢组分析的结合表明，DHA损害了电子传输链（ETC）的功能，通过抑制三碳酸（TCA）循环范围，并破坏分裂的PMF，并破坏pmf的临时性。 转移。 我们的发现为提供了新的见解质粒抗生素抗性基因（ARGS）的共轭转移是ARG传播的重要途径。据报道，越来越多的抗生素和非抗生素化合物有助于ARG的传播，强调了控制这种水平转移的潜在挑战。开发阻断或延迟含有ARG质粒转移的共轭抑制剂是控制抗生素耐药性传播的有前途的策略。尽管这种抑制剂很少见，但它们通常表现出相对较高的毒性和体内效力低，并且它们的作用机制却不足以理解。在这里，我们研究了一种用于治疗疟疾的青蒿素衍生物（一种用于治疗疟疾）对结合的影响。dha抑制了埃斯耐里希亚大肠杆菌中超过160倍的体外体外，在小鼠模型中，含有超过160倍的（INCX4质粒）在大肠杆菌中超过160倍（MCR-1）的结合，在体外的体外超过160倍（INCI2质粒）。它还抑制了带有碳青霉烯电阻基因BLA NDM-5的Incx3质粒的转移，体外超过两倍。检测细胞内三磷酸（ATP）和质子动力（PMF）以及转录组和代谢组分析的结合表明，DHA损害了电子传输链（ETC）的功能，通过抑制三碳酸（TCA）循环范围，并破坏分裂的PMF，并破坏pmf的临时性。 转移。我们的发现为此外，在DHA暴露期间，与结合和菌毛产生相关的基因的表达水平显着下调，这表明可以抑制结合的转移设备。
用Origen生成功能性质粒起源
1加州大学伯克利分校的创新基因组学研究所，伯克利，加利福尼亚州94720，美国†这些作者对这项工作也同样做出了贡献：杰米·欧文（Jamie Irvine），吉利亚萨·阿罗拉（Jamie Irvine），吉利亚萨·阿罗拉（Jigyasa Arora），杰纳森·阿罗拉（Jigyasa Arora），乔纳森（Jonathan N.V. Martinson）能够复制。专注于质粒作为最小复制系统，我们开发了Origen，这是一种语言模型，在维持基本功能元素的同时，会产生复制的新质粒起源。我们在实验上验证了Origen创建功能起源的能力，该功能与现有野生类型不同，这表明了该模型捕获生物复制的复杂且经常神秘的机制的能力。
导航大规模质粒DNA纯化
先前用于质粒DNA（PDNA）纯化的小规模方法无法满足该行业对足够数量的需求。大量的细菌裂解物是较大的体积发酵的结果，传统的大规模下流净化过程具有一些缺点和局限性。市场被认为会继续扩展，因此需要有效，具有成本效益和可扩展的纯化过程的需求显而易见。在pDNA产量和纯度之间存在至关重要的权衡，因此需要在色谱量化步骤中进行仔细考虑。每个步骤都会提高纯度，同时牺牲产量。为了达到更高程度的pDNA产量，最佳纯化需要一个单一的构图步骤，特别是与过滤结合的阴离子交换色谱（AEX）。另外，建议采用涉及AEX的两步纯化方法，然后是疏水相互作用色谱法（HIC），以消除互补杂质并达到高纯度。此外，建议使用整体色谱支撑物的利用来促进纯粹的纯化策略。这是由于整体促进了较高的结合能力，即使在高流速下，也可以确保稳健和一致的结果。
p120 HDR 质粒 (h): sc-400943-HDR
含有由 CRISPR/Cas9 系统产生的双链断裂 (DSB) 的 DNA 可以通过非同源末端连接 (NHEJ) 或同源定向修复 (HDR) 途径进行修复 (1,2,3)。NHEJ 修复途径在切割位点引入非特异性插入或缺失，而 HDR 途径允许在 DSB 位点进行精确的基因编辑 (1,2,3)。靶向特异性 HDR 质粒为 DSB 提供 DNA 修复模板，当与 CRISPR/Cas9 KO 质粒共转染时，能够在发生 Cas9 诱导的 DNA 切割的位置插入特定的选择标记 (1,2)。HDR 质粒可以整合红色荧光蛋白 (RFP) 基因以直观地确认转染，并整合抗生素抗性基因 (嘌呤霉素) 以选择含有成功 CRISPR/Cas9 双链断裂的细胞。嘌呤霉素抗性和 RFP 编码基因两侧是两个 LoxP 位点，这些位点可被 Cre 载体识别，之后可利用该位点从基因组 DNA 中去除这些选择标记 (4,5)。
对照 CRISPR/Cas9 质粒：sc-418922
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