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World File Search SystemRAD51
2024; 15（3）：699-713。 doi：10.7150/jca.90371使用PARP抑制剂Olaparib与X
目的：骨肉瘤来自对辐射不敏感的骨形成间充质细胞。这项研究旨在使用PARP抑制剂Olaparib与X射线或碳离子（C-ION）（C-ION）一起研究骨肉瘤细胞（U2OS和K7M2）的放射敏化。方法：使用CCK-8和克隆形成测定法评估了Olaparib对辐照后骨肉瘤细胞增殖的影响。细胞，Olaparib对细胞周期的影响，并在48H后通过流式细胞仪分析凋亡。免疫荧光用于染色核，γ -H2AX，53BP1和RAD51蛋白，在荧光显微镜下观察到γ -H2AX，53BP1和RAD51灶的数量。评估了Olaparib与辐射对骨肉瘤细胞中双链DNA断裂的影响。结果：在相同的辐射剂量下，Olaparib降低了辐照骨肉瘤细胞的增殖和落形成能力（P <0.05）。Olaparib单一疗法诱导骨肉瘤细胞中的最小凋亡作用和G 2 /m相阻滞，并且单独辐照诱导中度细胞凋亡和G 2 /M期。然而，辐射与olaparib结合显着增加了凋亡细胞的百分比和骨肉瘤细胞中的G2/m期停滞（p <0.05）。免疫荧光实验表明，与辐射组相比，合并组的γ -H2AX和53BP1灶的形成显着增加（P <0.05）。辐照组中RAD51灶的表达水平高于对照组中的RAD51焦点（p <0.05）。但是，合并组中RAD51灶的数量显着减少（p <0.05）。结论：PARP抑制剂Olaparib与辐照（X射线或C-ION）结合增强了骨肉瘤细胞系的放射敏度（U2OS和K7M2）。我们的发现为Olaparib在克服骨肉瘤中耐药性中的临床应用提供了潜在的理论基础。
探索FDA批准的人元病毒治疗的抗病毒药物：综合计算洞察
1。RNA系统生物学，Istituto Italiano di Tecnologia，Genoa，通过Enrico Melen，83，16152，Italy Genoa，意大利2。计算和化学生物学，Istituto Italiano di Tecnologia，通过Morego 30，16163，Genoa，意大利3.都灵大学药物科学技术系经过Pietro Giuria，9，10125意大利都灵，4。纳米镜检查和NIC@IIT，Istituto Italiano di Tecnologia，Genoa，意大利5。结构生物物理学设施，Istituto Italiano di tecnologia，通过Morego 30，16163，Genoa，意大利6.博洛尼亚大学药学和生物技术系，通过Belmeloro 6，40126，意大利博洛尼亚7。电子显微镜设施（EMF），Istituto Italiano di Tecnologia，通过Morego 30，16163，Italy Genoa，意大利8.CECAM，瑞士联邦技术研究所Lausanne（EPFL），瑞士摘要RAD51和BRCA2之间的相互作用在同源重组（HR）中起关键作用，这是对癌细胞生存至关重要的关键DNA修复机制。破坏这种相互作用会增加癌细胞对化学治疗剂的敏感性。在这里，我们采用了计算机方法来设计新型的适体（固定的单链寡核苷酸），专门设计用于结合RAD51。这些适体的开发是为了选择性调节Rad51的核募集及其在DNA修复过程中的作用。领先的候选者对Rad51的高亲和力，与BRCA2在体外与相同的相互作用位点竞争，这是通过Biolayer干涉法（BLI）和荧光寿命成像显微镜（FLIM）确认的。我们测试了领先的适体在胰腺癌细胞中的疗效，并观察到它显着阻碍了RAD51核定位，降低了同源重组（HR）效率并增加了DNA损伤。至关重要的是，我们的适体增强了PARP抑制剂Olaparib的细胞毒性，利用合成致死性（SL）诱导癌细胞死亡。我们的研究展示了一种基于适体的方法，用于选择性地靶向DNA修复途径中的蛋白质相互作用，从而引入了一种有希望的基于SL治疗的途径，用于适用于广泛的癌症。
引文：Saud A Abdulsamad 等人。“基因编辑技术：同源重组、反义 mRNA、RNAi、定点诱变和 CRISPR/
RecA/Rad51家族蛋白诱导的DNA结构的内在动态特性：DNA作为基因组材料可能比RNA更具优势”。美国国家科学院院刊98.15（2001）：8425-8432。
使用长ssDNA模板进行同源指导修复的IPS细胞中有效的基因敲击蛋白
CRISPR/CAS技术的常见应用涉及工程基因敲击素，其中DNA序列被取代或插入特定的基因组基因座。In contrast with CRISPR-mediated indels, which result from the error-prone non-homologous end joining (NHEJ) pathway, gene knockins are often engineered via homology-directed repair (HDR), typically through the use of CRISPR reagents (Cas enzyme and guide RNA) in tandem with a DNA template that shares homology with the target site and encodes for the desired modification (Hsu et al., 2014;图1，下面）。用于HDR的模板可以是双链DNA（DSDNA，线性或质粒）或单链DNA（SSDNA），并且最近的发现表明，修复机制取决于使用的模板类型而变化。 dsDNA触发了一种反映减数分裂同源重组（HR）的RAD51依赖性机制，而HDR涉及ssDNA（称为单链模板修复或SSTR）是Rad51独立的，并且需要多个组件，并且需要多个组成部分的Fanconi Anemia Anemia（FA）维修路径（RICHARDARDSON ERATHEWAY（RICHARDARSEN）等。
深入探索鲜为人知的基因
关于鲜为人知或中等风险基因、低等位基因和 VUS TMC 癌症遗传学部门拥有 10,000 多例病例的精选种系基因型和表型数据 - 不仅包括 BRCA1/2、MLH1、MSH2、TP53、PALB2 等特征明确的基因，还包括鲜为人知的基因（CHEK2、BRIP1、RAD51、CDH1、MSH6、PMS2、SDH 等）。我们已将数百个 ClinVar VUS 重新归类为可能良性，并将一些重新归类为可能致病性
三氧化二砷具有细胞毒性和放射增敏作用......
我们评估了 ATO 对不同儿科 SHH-MB 细胞系（ONS-76：TP53 - 野生型；DAOY 和 UW402：TP53 - 突变型）的潜在影响。确认了 MB 细胞系分子亚群并验证了 TP53 突变。单独使用不同浓度（1-16 µ M）的 ATO 处理或与辐射剂量（0.5、1、2 和 4 Gy）组合处理后评估了细胞活力、克隆形成能力和细胞凋亡。通过 WB 评估了 Rad51 和 Ku86 蛋白。ATO 处理降低了所有 SHH-MB 细胞系的细胞活力。ATO 暴露后还观察到克隆形成能力显著下降和细胞凋亡率升高，SHH-MB TP53 - 突变型的细胞死亡更明显（> 70%）。 ATO 与放射治疗联合治疗也减少了 UW402 肿瘤细胞中的菌落形成，这与 DNA 损伤修复蛋白 Rad51 和 Ku86 无关。计算机模拟分析表明，来自细胞周期和 p53 通路的一组基因在 SHH 肿瘤亚型中存在差异表达，这表明细胞系可能根据基因表达谱对疗法产生反应。在此，我们展示了 ATO 在儿童 SHH 细胞系中的细胞毒性，对 MB-SHH TP53 突变细胞具有明显的放射增敏作用。这些结果突出了 ATO 单独或与放射疗法联合使用的潜力，支持进一步的临床研究。
DNA双链断裂修复途径的选择与调控
图 1 DSB 修复途径总览 .DSB 发生后 , Ku70-80 会最先结合上来 , 如果不发生末端切除 , 会继而招募 DNA-PKcs, ligase IV, XRCC4 等 cNHEJ 核心因子介导 cHNEJ 修复途径 .如果末端发生 MRN-CtIP 介导的末端切除 , 则会产生 ssDNA 抑制 cNHEJ 修复途 径 .短程切除和长程切除产生的 ssDNA 可以通过链内退火进行修复 , 分别被称为 alt-EJ 和 SSA.长距离切除产生的 ssDNA 也可以 在 BRCA2-PALB2-BRCA1 复合体的帮助下和 RAD51 形成核蛋白纤维 , 进行同源找寻和连入侵过程 , 从而进入 HR 修复途径 .HR 途径又可以分为 BIR, SDSA 和 DSBR Figure 1 Overview of DSB repair pathways.The broken ends are first recognized and bound by Ku70-80.Without end resection, other cNHEJ core factors, such as DNA-PKcs, ligase IV, XRCC4, would be recruited to DSBs to mediate cNHEJ pathway.When MRN-CtIP-mediated resection occurs, the generated ssDNA will inhibit cNHEJ pathway.ssDNA from short-range and long-range resection can anneal in-strand to resolve the damages, termed Alt-EJ and SSA, respectively.ssDNA from long-range resection can also be bound by RAD51 to form nucleoprotein filament under the help of BRCA2-PALB2-BRCA1 complex.Nucleoprotein filament carry out homologous searching and strand invasion, promoting HR pathway.The HR pathway could be divided into BIR, SDSA and DSBR
插入 S3 HPV31 亚系图 h
补充图 S3。对照组、癌前病变和癌症中 DNA 修复基因表达的分析。这些箱线图表示与其组织学类别相对应的 DNA 修复基因的表达水平。基因表达显示在 y 轴上，而组织学类型显示在 x 轴上。与对照组相比，癌症和癌前病变中 BRCA1 和 BRCA2 的表达增加。与癌前病变和对照组相比，癌症中 PALB2 和 RAD51 的表达增加。*** 表示 p < 0.001 的显著性，** 表示 p < 0.01 的显著性，* 表示 p < 0.05 的显著性。
玛卡酰胺 B 抑制肺癌进展...
摘要：玛卡酰胺是从玛卡中提取的一类具有生物活性的天然产物，据报道，它对癌症有抑制作用。然而，它们在肺癌中的作用目前尚不清楚。在本研究中，玛卡酰胺B被证明能抑制肺癌细胞的增殖和侵袭，这分别通过细胞计数试剂盒-8和Transwell测定确定。相反，玛卡酰胺B诱导细胞凋亡，经Annexin V-FITC测定确定。此外，玛卡酰胺B和聚（ADP-核糖）聚合酶抑制剂奥拉帕尼联合治疗进一步抑制了肺癌细胞的增殖。在分子水平上，经蛋白质印迹法测定，玛卡酰胺B显著增加了毛细血管扩张性共济失调突变（ATM）、RAD51、p53和裂解胱天蛋白酶-3的表达，而Bcl-2的表达水平降低。相反，当用小干扰RNA技术敲低ATM表达时，在用玛咖酰胺B处理的A549细胞中，ATM、RAD51、p53和cleaved caspase-3的表达水平降低，而Bcl-2的表达水平升高。一致地，ATM敲低部分挽救了细胞增殖和侵袭能力。总之，玛咖酰胺B通过抑制细胞增殖和侵袭，诱导细胞凋亡来抑制肺癌进展。此外，玛咖酰胺B可能参与调控ATM信号通路。本研究为治疗肺癌患者提供了一种潜在的新型天然药物。
抑制PRPF19障碍宫颈癌Qianqian Wang 1， *， *，†，Jinwei Zhang 1，†，YUE
摘要背景：宫颈癌（CC）是一种普遍且致命的妇科恶性肿瘤。前MRNA处理因子19（PRPF19）与多种癌症的进展有关，并证明在调节DNA损伤反应中起作用。然而，PRPF19及其相关途径在CC发展中的特定调节作用仍然很少了解。方法：通过蛋白质印迹检查蛋白质表达。通过菌落形成测定法检查了生存部分和菌落数量。通过免疫荧光（IF）测定，γ-酮H2A家族成员X（γH2AX）的荧光强度得到了验证。通过Transwell分析测试了细胞侵袭和迁移。结果：在这项研究中，分析了来自基因表达分析的互动分析（GEPIA）和对癌症基因表达数据（UALCAN）在线数据库的用户友好分析工具，并且发现发现在颈椎鳞状癌（CESC）组织中，PRPF19显着过表达。此外，我们证实了CC中PRPF19的表达升高，抑制PRPF19可以提高CC细胞对X射线处理的敏感性。此外，X射线暴露后PRPF19敲低增强了DNA损伤，这是通过γH2AX荧光强度增加的增加，P- DNA-蛋白激酶（PK）和RAD51重物组织酶（RAD51）的水平降低了。PRPF19抑制也抑制了细胞迁移和侵袭。从机械上讲，PRPF19通过下调P-SRC/SRC和YAP1水平，促进了肉瘤（SRC） - YES相关蛋白1（YAP1）途径的激活。结论：PRPF19抑制作用会损害肿瘤发生，降低放射线并破坏CC中的DNA损伤修复，部分是通过调节SRC-YAP1途径的调节，从而支持PRPF19作为CC治疗的一种前瞻性生物目标。