70 在肾细胞癌 (RCC) 中高度表达,而在正常组织中表达有限,这使其成为治疗免疫原性实体瘤的有吸引力的 CAR-T 靶点。在这里,我们生成并表征了一组基于抗 CD70scFv 的 bAR T 细胞。尽管 T 细胞上表达 CD 70,但仍从具有强体外活性的一组 scFv 中产生了 CAR-T。发现 CD 70CAR 的表达掩盖了顺式 CD 70 检测并提供针对 CD 70CAR T 介导的自相残杀的保护。已鉴定出两种独特的 CAR-T 细胞类别,它们具有不同的记忆表型、活化状态和细胞毒活性。表位图谱显示,与结合 CD 70ECD 膜近端区域的 CAR 相比,结合 CD 70ECD 膜远端区域的 CAR 属于活性更高、分化程度更高的类别。 CD 70CAR T 细胞使用利妥昔单抗的开关进行评估,以控制 CAR T 功能,并在小鼠模型中显示出对 RCC 细胞系和患者来源的异种移植瘤的强大抗肿瘤活性。评估与两种主要 CAR 脱靶结合的组织交叉反应研究显示,在罕见的组织常驻淋巴细胞中出现膜染色,从而与已知的 CD 70 表达模式相匹配。在食蟹猴 CD 3-CD70 双特异性毒性研究中观察到与 T 细胞活化和 CD 70 表达细胞消除相关的预期结果,包括细胞因子释放和淋巴组织中的细胞丢失。最后,通过 TALEN® 基因编辑消除 T 细胞受体,大规模生产了高功能性 CD 70 同种异体 CAR T 细胞。综上所述,这些功效和安全性数据支持对 CD 70CAR T 细胞用于治疗 RCC 的评估,并推动同种异体 CD c 70CAR T 候选药物进入 I 期临床试验。(A)
抗体疗法具有强大且高度选择性的靶性结合,现在用于治疗各种疾病。然而,为了使它们用于治疗脑疾病,必须在血脑屏障(BBB)上递送,因为没有主动运输,只有大约0.01%的静脉注射剂量到达大脑。大脑递送可以通过能够结合自然转运蛋白(例如转铁蛋白受体(TFR))结合受体的BBB班车来完成。本论文研究了设计TFR结合班车的策略,以及如何增强抗体疗法的蛋白质表达。在论文I中,我们共享了我们更新的瞬态基因表达(TGE)协议,并开发了一个小规模版本,以影响测试许多条件的成本限制。对于两种方案,观察到蛋白质表达的巨大变化,促使未来研究研究其原因。在论文II中,我们研究了BBB中存在的硫酸乙二醇乙酰肝素(HS)是否可以改善大脑递送。我们的结果表明,BBB穿梭SCFV8D3不取决于所识别的HS结合位点,并且添加新的HS结合位点并不能增强交付。但是,由于HS的复杂性和异质性,需要进一步的研究。降低BBB班车的TFR亲和力已被证明可以增强高亲和力抗TFR抗体的治疗剂量的递送,例如,二色8D3抗体。在论文III中,我们将该策略应用于基于8d3(SCFV8D3)的单链片段变量(SCFV)。我们的亲和力突变体表现出降低的TFR亲和力,更长的血液半衰期和更高的脑浓度。使用我们的内部BBB反式分析,我们得出结论,脑浓度的增加可能是由于血液半衰期延长。在纸IV中,我们将TFR配体全转蛋白融合到部分二价RMAB158-SCFV8D3抗体的TFR结合臂上。我们的结果表明,TFR的结合从部分转移到完全二价,导致体外转胞细胞增多显着降低。没有二价结合的融合holotf的潜在跨胞菌病促进作用和/或抵消。但是,该策略仍然可以证明对单价TFR粘合剂有用。总而言之,在治疗剂量下,单价和低至中度亲和力可能是TFR介导的脑递送的有益结合特性。但是,是否有可能通过HS结合或HOLOTF融合来增强大脑递送,这需要进一步研究。
肌萎缩性侧索硬化症(ALS)是一种进行性神经退行性疾病,主要由肌肉萎缩和体内无力引起,呼吸肌瘫痪定义了预后。日本大约有10,000例患者,其中10%有家族史,大约60%的病例具有致病基因。另一方面,90%的患者被称为零星,大脑和脊髓病变的大部分被称为TAR DNA结合蛋白43KDA(TDP-43)。 TDP-43是一种RNA结合核蛋白,具有两个RNA结合基序(RRM1,RRM2),但在ALS神经元和少突胶质细胞中形成特征性包容物,以及对细胞质量的异位定位。近年来,据报道,当许多RNA结合蛋白和RNA聚集在一起时,会发生液 - 液相分离(LLP),从而形成了称为液滴的非膜结构,并且从液滴中形成了固体原纤维与Als和Crymoss exteriation for cy Intreation for Ceryross for cy Intreation for Ceryross grouse for Cerymoss of Cryomoss of Cryopopopopopopopopse的形成非常相关。聚合。我们专注于RRM1中二硫键的面对面布置在维持TDP-43的构象结构和RRM2结构域的生理二聚体形成中,在先前的研究中使用晶体学分析方法揭示了揭示的RRM2结构域,并成功地产生了单克隆抗体(3B12A),这些抗体(3B12A)识别了特定识别Misfloded tdd tds-43。另一方面,为了澄清野生型TDP-43结构转化的分子背景,我们进行了高压NMR分析,并观察到RRM1中的二硫键是拉链的功能,可以作为Zipper功能,以维持TDP-43的生理ddp-43的生理效果,该ddp-43 totrig totrig totrig to n-ternequ and terned to n-ternbore and temrig totrig to tht trign and trign totrig to n-terneque istriend to n-ternem and tdp-43 TDP-43形成病理聚集体,创建独特的转基因小鼠,以确定TDP-43在ALS病理学中的异位定位和骨料形成的重要性,并分析表型。尽管聚集体有助于病理发现的恶化,主要基于神经胶质病,但症状的表型是长时间的异位定位,并且症状比运动瘫痪更为主要是心理病理学症状。另一方面,由3B12A抗体的杂交瘤mRNA构建了VH-VL的单链抗体(SCFV)的表达基因,并产生了供应伴侣蛋白介导的自噬(CMA)信号的自溶内抗体。使用子宫内电穿孔,在培养的HEK293A细胞和胎儿小鼠大脑中,细胞AGG TDP-43显着降低。我们目前正在进一步验证安全和功效。
背景 晚期不可切除和/或转移性癌症患者迫切需要治疗。粘蛋白 1 (MUC1) 是一种特征明确的异二聚体糖蛋白,在许多上皮源性肿瘤中过表达,由非共价连接的 N 端 (MUC1-N) 和 C 端 (MUC1-C) 单体组成。MUC1-C 表位选择性地出现在乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胃癌、肺癌等上皮源性实体瘤中。由于细胞极性的丧失,MUC1-C 也广泛且易于在整个肿瘤组织中表达,这是肿瘤发生的标志之一。 P-MUC1C-ALLO1 是一种针对 MUC1-C 表位的完全同种异体 CAR-T,采用非病毒转座子整合(piggy-Bac ® DNA 递送系统)制造,可产生高度富集的 T 干细胞记忆 (T SCM) 产品。它含有 3 个转基因:基于抗 MUC1-C 人源化 scFv 的 CAR、用于提高产品同质性的 DHFR 药物选择基因和基于 iCasp9 的安全开关基因(可在需要时快速消融 CAR-T)。这些细胞使用 Cas-CLOVER ™ 位点特异性基因编辑系统进行基因编辑,通过敲除 T 细胞受体 β 链 1 基因来消除所有细胞中内源性 T 细胞受体的表达以防止移植物抗宿主 (GvH) 反应,并敲除 b2-微球蛋白基因以消除 MHC I 类的表达,从而减弱宿主抗移植物反应。在小鼠三阴性乳腺癌和卵巢癌模型中观察到 P-MUC1C-ALLO1 的临床前疗效,这为这项首次人体 (FIH) 1 期试验提供了理论依据。方法这是一项 1 期、多中心、开放标签、FIH、3+3 设计,旨在评估 P-MUC1C-ALLO1 对 RECIST 1.1 可测量且对标准治疗有抵抗力/不适合的晚期或转移性上皮源性癌症患者的作用。最多 100 名患者将被纳入 4 个单次和周期性给药组,使用两种不同的淋巴细胞清除 (LD) 方案(环磷酰胺/氟达拉滨 ± 利妥昔单抗)。每个组的计划剂量递增范围为 0.75 至 15 x 10 6 细胞/kg。本研究的主要目标包括确定最大耐受剂量 (MTD)、评估总体安全性和耐受性、初步疗效和疾病反应。探索性终点将包括 MUC1-C 肿瘤表达和与反应的相关性、P-MUC1C-ALLO1 细胞动力学和生物标志物分析,包括 MUC1 相关肿瘤标志物 CA15-3 和 CA27-29 和 CTC。结果迄今为止,已有三名患者接受了 P-MUC1C-ALLO1 治疗(食管腺癌、结直肠腺癌和乳腺癌)。迄今为止,P-MUC1C-ALLO1 治疗耐受性良好,未观察到剂量限制性毒性、CRS 或 GvH 疾病。本研究继续招募受试者,并将提供更新的数据。试验注册 NCT05239143
含有假定的 G-四链体形成序列的寡核苷酸(PQS;G ≥ 3 N x G ≥ 3 N x G ≥ 3 N x G ≥ 3)在阳离子存在下的生理缓冲条件下(Bochman 等人,2012 年)。由于其高热力学稳定性,组装的 G4 需要通过酶促分解。已经开发出体外用于监测 G4 形成的方法(Balasubramanian 等人,2011 年;Bryan 和 Baumann,2011 年)。使用这些方法已经证明了分解 G4 的酶活性。这些酶包括具有 G4 结合和解旋活性的 DNA 解旋酶,例如 BLM、WRN、PIF1、FANCJ、XPD、DNA2 和 RTEL1(Bochman 等人,2012 年;Maizels,2015 年)。使用计算机分析或荧光成像、免疫沉淀或 pull-down 实验来预测体内 G4 的形成,使用有价值的工具 - 例如特异性识别 G4 的免疫球蛋白和单链可变片段 (scFv) (Henderson 等人,2013)、G4 结合化合物 (Mendoza 等人,2016) 或 G4 结合蛋白 (Maizels,2015)。使用这些工具,可以通过免疫沉淀或针对纯化的基因组 DNA 或染色质的 pull-down 来识别 G4 位点,并且这些位点中的很大一部分重现了 PQS (Chambers 等人,2015;Hänsel-Hertsch 等人,2016;Lam 等人,2013;Muller 等人,2010)。 PQS 在基因的调控区(例如启动子、内含子或非翻译区 [UTR])中过度表达,包括致癌基因、重复区(例如端粒和 rDNA)和复制起点 (Maizels & Gray, 2013 )。使用抗体在人类细胞中进行的全基因组 G4 映射揭示了 G4 存在于基因调控区和端粒中 (Hänsel-Hertsch et al., 2016 ; Liu et al., 2016 )。许多 G4 被映射在转录起始位点周围,G4 形成的频率与相应基因的转录水平呈正相关 (Spiegel et al., 2021 ; Zheng et al., 2020 )。使用抗体对 G4-DNA 进行荧光标记,显示细胞核或染色体上存在颗粒状信号;一些信号位于端粒或着丝粒上 (Biffi et al., 2013; Henderson et al., 2013)。使用荧光标记化合物对 G4- DNA 进行可视化,可显示位于核仁中的较大信号,以及位于细胞核中的一些较小信号 (Rodriguez et al., 2012),或整个细胞核中均匀分布的信号 (Shivalingam et al., 2015)。然而,人们对使用体内成像获得的许多未表征信号的亚细胞或基因组位置了解甚少。越来越多的证据表明,在基因体内或周围形成的 G4 通过促进或抑制转录来调节基因活性 (Bochman et al., 2012; Mendoza et al., 2016)。尽管具有这些生物学含义,但 G4 在空间上阻碍了 DNA 复制和转录 (Bochman et al., 2012; Maizels, 2015)。这些生物事件的拖延会增加基因毒性损害的风险;G4 结构清除不足可能