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World File Search System基因编辑
化脓性链球菌 Cas9 核糖核蛋白递送，用于在锥虫和利什曼原虫中进行高效、快速和无标记的基因编辑
图 1 布氏锥虫 PCF 中的 GFP 失活。（a）对组成性表达胞浆 eGFP 的布氏锥虫进行荧光流式细胞术分析。在用 20 μ g（无 Cas9、Cas9/gRNA GFP1、Cas9/gRNA GFP2、Cas9/gRNA GFP3）或 60 μ g（Cas9/gRNA GFP2）来自 IDT 的 RNP 复合物转染后 24 至 72 小时随时间监测 GFP 荧光，条形图显示用不同向导转染后 72 小时 GFP 阴性细胞的百分比（n = 3）。采用 Prism 软件进行统计分析，采用 t 检验（非配对、正态分布、参数检验和双尾）。显着性水平（p 值）用星号表示。 （b）上图显示了允许 e Sp Cas9 在大肠杆菌中表达的质粒的示意图。蓝色框表示蛋白质 N 端和 C 端的两个多组氨酸序列，红色框表示 TEV 和肠激酶 (EK) 蛋白酶的切割位点，灰色框表示三个核定位信号 (NLS)，黑色框表示 FLAG 表位的三个重复，橙色框表示 e Sp Cas9 编码序列。下图显示了在用来自 IDT 或实验室纯化 (Lab) 的 RNPs 复合物 (无 Cas9、20 μ g Cas9/gRNA GFP2、40 μ g Cas9/gRNA GFP2、40、60 和 80 μ g Cas9/gRNA GFP2) 转染后 72 小时监测的表达 GFP 的 T. brucei 的荧光流式细胞术分析。（c）不再表达 GFP 的克隆中 GFP 基因的一部分的序列比较。该序列仅显示 GFP2 向导 RNA 所针对的区域。灰色框（H1 和 H2）突出显示可能用于 MMEJ 修复的同源区域。由实验室纯化的 Cas9 失活产生的序列和来自商业 Cas9 的序列分别标记为 Lab 和 IDT。下面显示了 Dc6 和 Ba10 克隆的相应色谱图（置信区间 95%— p 值样式：0.1234 (ns)；0.0332 (*)；0.0021 (**)；0.0002 (***)；< 0.0001 (****)）。
技术风险（转基因、基因编辑），欧洲的问题是什么？更广泛的历史视角
要理解为什么欧洲限制使用某些技术，而美国却没有对相同技术采取同样的措施，植物生物技术就是一个有用的例子。显然，欧洲是转基因抵制运动的发源地。一个短期原因可以从其 1990 年的指令中寻找，该指令创建了一个名为“转基因生物”的司法对象。它于 2001 年被一项新指令取代，但保留了其对转基因的毫无意义的定义（Tagliabue，2016a）。这种监管方法侧重于“遗传物质以非自然方式改变的生物”，给人的印象是转基因生物本质上是不同的且有风险，因此在“疯牛病”危机之后，不信任的消费者有可能拒绝转基因这项有前途的技术。 2018 年 7 月，欧洲法院 (CJEU) 的一项裁决（“通过诱变获得的生物体属于转基因生物，原则上应遵守转基因指令规定的义务” 1 ）对生物技术人员来说是一个新的打击。然而，随之而来的问题是：为什么所有这些事件都发生在欧洲？要理解这一点，我们需要描述意识形态背景，并以此从更广泛的历史视角来看待。
改进的主要编辑允许在 Physcomitrium patens 中进行常规可预测的基因编辑
高效、精准的基因编辑是任何反向遗传学研究的黄金标准。最近开发的 Prime Editing 方法，即改进的 CRISPR/Cas9 [成簇的规律间隔的回文重复序列 (CRISPR)/CRISPR 相关蛋白] 编辑方法，已经达到了精度目标，但其编辑率还有待提高。我们提出了一种改进的方法，可在模型植物 Physcomitrium patens 中进行常规 Prime Editing，同时探索潜在的新 Prime Editing 改进。使用标准化的原生质体转染程序，通过直接植物选择评估了针对 APT 报告基因的多种 Prime Editing 向导 RNA (pegRNA) 结构和 Prime Editor 变体。综合起来，Prime Editor 表达的增强、pegRNA 3ʹ 延伸的修改以及在 pegRNA 的逆转录酶模板序列中添加同义突变，可显著提高编辑率，而不会影响编辑质量。此外，我们表明，prime editing 可以通过间接选择来编辑目标基因，正如 Ppdek10 突变体的产生所证明的那样。此外，我们确定植物逆转录转座子逆转录酶能够实现 prime editing。最后，我们首次展示了使用两个独立编码的肽进行 prime editing 的可能性。
基因编辑治疗人类疾病的进展与协调（COST Action CA21113 GenE-HumDi 会议纪要）
Alessia Cavazza, Ayal Hendel, Rasmus O. Bak, Paula Rio, Marc Güell, Duško Lainšček, Virginia Arechavala-Gomeza, Ling Peng, Fatma Zehra Hapil, Joshua Harvey, Francisco G. Ortega, Coral Gonzalez-Martinez, Carsten W. Lederer, Kasper Mikper, Manuel Gasen, Nechaul Gaster, Gaster Gonçalves, Julie Petersen, Alejandro Garanto, Lluis Montoliu, Marcello Maresca, Stefan E. Seemann, Jan Gorodkin, Loubna Mazini, Rosario Sanchez, Juan R. Rodriguez-Madoz, Noelia Maldonado-Pérez, Torella Laura, Michael Schmueck-Henneresse, Cristina Gloria, Gloria Gloria, Julian Güne makova-Trojanowska, Annarita Miccio, Francisco Martin, Giandomenico Turchiano, Toni Cathomen, Yonglun Luo, Shengdar Q. Tsai, Karim Benabdellah, on behalf of the COST Action CA21113 (https://www.genehumdi.eu)
reni-cel，一种研究的ascas12a基因编辑的细胞...
*βS /βS，βS /β0，βS /β +，βSβD，βSβoarab。†严重需要医疗护理（尽管在治疗期间进行了羟基脲或其他支持护理措施）定义为：除了血管co骨外，没有其他原因的急性发作，导致≥24-h-h的医院或eri≥2访问日期或痛苦的次要次数，导致痛苦的次数均与72次验证，急性priapism持续> 2小时，需要去医疗机构（有或没有住院）； ACS定义为胸壁疼痛，与发烧和/或呼吸道症状相关的胸部X射线膜上的新肺浸润的发现；或肝或脾隔离，这被定义为与器官区域疼痛相关的器官尺寸突然增加，在24小时内的血红蛋白浓度≥2g/dL的降低，以及，肝隔离，肝功能测试异常变化，肝功能测试异常，包括偶联的胆红素疾病，包括胆汁疾病。β，β-球蛋白等位基因； βS，镰状β-球蛋白； ACS，急性胸部综合征；嗯，急诊室； H，小时； HLA，人白细胞抗原； RBC，红细胞； Reni-Cel，Renizgamglogene AutogedTemcel； SCD，镰状细胞疾病； Voe，Vaso-Occlusive活动。clinicaltrials.gov nct04853576。可用：https：//clinicaltrials.gov/ct2/show/nct04853576。2025年1月访问。
Reni-Cel，一种研究的ASCAS12A基因编辑的细胞药
*可在八名患者中评估的植入。†ANC≥0.5×10 9 /L的三个连续测量。基于八名在数据截止日期之前获得中性粒细胞植入的患者。‡连续三个连续测量，血小板计数≥20×10 9 /L，至少在血小板输血后7天开始，在血栓蛋白后10天。基于八名患者在数据截止日期之前获得血小板植入的患者。ANC，绝对中性粒细胞计数； Reni-Cel，Renizgamglogene AutogedTemcel； SD，标准偏差。
病毒和非病毒对基因编辑的免疫反应......
摘要：遗传性视网膜疾病 (IRD) 是工业化国家失明的主要原因，基因疗法正迅速成为治疗这类疾病的可行选择。使用病毒载体的基因替换已成功应用于一组罕见疾病，并已发展到商业用途。这一技术以及基因编辑的进步为新一代疗法的出现铺平了道路，这些疗法使用 CRISPR-Cas9 原位编辑突变基因。这些基于 CRISPR 的药物可以作为病毒载体中的转基因、未包装的转基因或使用非病毒载体的蛋白质或信使 RNA 递送到视网膜。尽管眼睛被认为是一种免疫特权器官，但动物研究以及临床证据都得出结论，眼部基因疗法会引发免疫反应，在某些情况下会导致炎症。在这篇评论中，我们评估了有关预先存在的免疫力的研究，并讨论了先天性和适应性免疫反应，特别关注免疫
基因编辑辩论中的公众结构
基因编辑辩论中的公众结构 Morgan Meyer CSI-i3、巴黎高科矿业大学、PSL、法国国立科学研究院 世界卫生组织（WHO，《制定人类基因组编辑治理和监督全球标准专家咨询委员会》，2019 年，第 28 页）在其关于基因编辑治理的背景文件中写道：“这些年来，以及自 CRISPR-Cas9 发现以来，人们普遍认为需要让公众参与到基因组编辑辩论中。” 世卫组织进一步指出，包括科学家、国家科学院、伦理学家以及患者在内的各种利益相关者都呼吁进行公开辩论和对话。 如今，这种对公众的考虑并不少见；一些作者观察到，机构和政府内部的决策过程已通过公众参与而显著开放，沟通如今已成为“治理的基本要素”（Irwin，2010 年，第 107 页）。这种新的、更具包容性的治理形式促进了公众的积极参与，公众不再被视为无知或不理性的，而是一个需要咨询的实体。这些包容性的治理形式只是技术与公众之间可能出现的诸多纠葛之一：许多人坚信公众不应参与决策，科学进步只需要被“接受”。其他人仍然设想公众成员可以通过自制 CRISPR 套件和与所谓的“生物黑客”合作成为基因编辑的积极用户。这篇评论仔细研究并分析了公众在基因编辑辩论中的不同想象和定位。我认为，还有更深入分析公众结构的空间。基因编辑的应用领域从健康到环境和农业。该技术被认为可以治疗艾滋病毒、莱伯氏先天性黑蒙、镰状细胞病、囊性纤维化和β地中海贫血等疾病。农业领域经常引用的例子包括培育无角奶牛、不褐变的蘑菇，以及更普遍的培育更具有抵抗力或营养品质更高的植物。关于环境问题，基因编辑可能用于对抗生物多样性丧失和救助濒危物种（如鸟类）、控制入侵物种（如老鼠和兔子）、复活灭绝物种（如猛犸象）和控制害虫（通过针对昆虫和其他疾病媒介）。虽然基因编辑在许多领域都有影响，但本文将首先关注农业领域的公开辩论。公众类型公众的初步定位可以总结如下：公众必须接受。诸如“公众接受”和“消费者接受”之类的术语在辩论和学术出版物中很常见。仅举一个例子，我们读到人们需要“了解基因组编辑介导的植物育种的好处，信任相关法规”，并且“谨慎的风险-收益沟通”是必要的（Ishii & Araki，2016，第 1507 页）。公众在这里被定位为一个被动群体，而感知到的挑战是教育、告知和说服公众基因编辑的积极特征。科学家和政策制定者对“接受”一词的重视引出了一个问题：为什么尽管围绕转基因生物存在争议、呼吁“负责任”创新以及对赤字模型的批评，但公众仍然经常被描绘成无知的。
燕麦（Avena sativa）中基于 CRISPR-Cas9 的高效基因编辑系统
（未经同行评审认证）是作者/资助者。保留所有权利。未经许可不得重复使用。此预印本的版权所有者此版本于 2025 年 1 月 28 日发布。；https://doi.org/10.1101/2025.01.26.633040 doi：bioRxiv preprint