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摘要 通过等位基因置换进行基因定点突变是功能基因组分析和代谢工程的重要内容，但传统的通过选择标记对必需基因进行定点突变的方法存在很大挑战，因为第一步必需基因敲除将导致致死的表型。本文利用CRISPR/Cas9系统，发展了一种两端选择标记（Two-ESM）方法对酿酒酵母中的必需基因进行定点突变，成功构建了酿酒酵母必需基因ERG20（编码法呢基二磷酸合酶）的单突变和双突变体，突变效率达100%。此外，与传统方法相比，Two-ESM方法显著提高了突变效率，简化了遗传操作程序。通过动态调控突变基因的表达和整合模块的优化，进一步提高了基因组整合和突变效率。这种 Two-ESM 方法将有助于构建酵母功能基因组分析和代谢通量调控所需的必需基因的基因组突变。
酿酒酵母基因组必需基因的有效靶向突变
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