化学氮肥可以维持作物生产力,但是化学氮肥过度使用会导致经济成本和环境污染。减少氮肥使用使用的一种方法是将氮酶生物合成途径转移到非乳状植物中。Fe蛋白是氮酶的两个结构成分。NIFB是一个关键的成熟酶,它催化了结合和减少n 2的氮酶Femo-Concactor的生物合成中的第一个投入步骤。NIFB,NIFH,NIFD和NIFK的表达对于产生能够固定大气N 2的植物至关重要。在这项研究中,Paenibacillu Polymyxa Wly78的四个基因(NIFB,NIFB,NIFD和NIFK)通过CRE/LOXP重组系统组装在植物表达vector PCAMBIA1301中,从而产生重组表达vector PCAM- bia1301301-nifbhdk。然后,使用tumefaciens介导的转化将表达载体中携带的四个NIF基因共同融入了高地棉R15。通过PCR和RT-PCR选择了T 3代的纯合转基因棉线B2,B5和B17。QRT-PCR显示,NIFB,NIFH,NIFD和NIFK在类似水平的转基因棉中共表达。Western印迹分析表明,NIFB,NIFH,NIFD和NIFK是在转基因棉中共同生产的。棉花中四种关键的NIF蛋白(NIFB,NIFH,NIFD和NIFK)的共表达是工程氮酶生物合成途径的重要一步。
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