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光片(HILO)激发3,用DNA-Paint 6以下达到5 nm 4,5以下的横向定位精度(S SMLM)。但是,这是以有限的穿透深度为代价的,TIR <250 nm,而Hilo 7,8的视野降低了〜40×10 µm 2。SMLM也可以在共聚焦设置中实现,包括点扫描和旋转磁盘共聚焦(SDC),这使得更深的样品渗透9,使其比较成像组织样品。图像扫描显微镜(ISM)10通过像素重新分配将共聚焦显微镜11,12的空间分辨率增加一倍,并且在与SMLM结合使用时,SMLM最近达到了8 nm的S SMLM,尽管小FOV的小FOV为8×8 µm 2 13。为了提高采集速度和FOV尺寸,SDC在旋转盘上采用数百个螺旋针孔,并与摄像机而不是单点检测器相结合。SDC构型已适用于SMLM,使用DNA-PART 14,使用DNA-Origami样品使用DNA-Origami样品达到8 nm的平面定位精度和基础平面中的细胞22 nm。仍然,由于发射光被光盘阻断,由于兴奋强度降低,可实现的分辨率仍受到限制。在2015年,Azuma及其同事提出了具有光子光子重新分配(SDC-EPR)15的增强的SDC,这是一系列微胶片,以有效降低针孔尺寸并增加光子收集,以改善分辨率。这些微漏物收缩了焦点双重,将发射的光子引导回可能的起源点(图1a)。因此,这提出了一个问题:SDC-opr的表现能否优于当前的光学配置,克服渗透深度,视野和空间分辨率之间的权衡?In this Brief Communication, we show that SMLM on a SDC- OPR fluorescence microscope can achieve sub-2 nm localization precision in the basal plane and sub-10 nm up to 7 µm penetration depth within a FOV of 53 × 53 µm 2 using a commercially available SDC-OPR (CSU-W1 SoRA Nikon system).通过可视化,以前所未有的分辨率来强调SDC-OPR的功能,在果蝇的视觉想象盘的视网膜上皮中的附着力连接。

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