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田芥 ( Lepidium campestre ) 是一种潜在的油料作物，近几十年来一直在驯化。 CRISPR/Cas9 是快速改良性状和表征基因以及利用原生质体转染系统生成无转基因突变体的有力工具。然而，原生质体再生对许多植物物种来说仍然具有挑战性。在这里，我们报告了一种有效的田芥原生质体再生和转染方案。优化了基础培养基类型、植物生长调节剂的类型/组合和不同培养基上的培养时间等重要因素。在测试的基础培养基中，Nitsch 最适合 MI 和 MII 培养基中的原生质体生长。对于原生质体生长早期的细胞壁形成，相对较高的生长素浓度（0.5 mg L −1 NAA 和 2,4-D），不添加细胞分裂素，是维持原生质体活力的首选。细胞壁形成后，1.1 mg L −1 TDZ 与 0.05 mg L −1 NAA 或 2,4-D 结合使用可有效促进原生质体生长。在固体芽诱导培养基中，不含任何生长素的 1.1 mg L −1 TDZ 可使芽产生频率超过 80%。在 MI 培养基中培养时间过长会抑制原生质体生长，而在 MII 培养基中培养时间过长会显著延迟芽形成。利用这种优化的原生质体再生方案，我们建立了一种有效的 PEG 介导的转染方案，使用含有 GFP 基因的载体，转染效率为 50 – 80%。这种有效的原生质体方案将有助于通过基因组编辑进一步遗传改良田芥，并有利于开发相关植物物种的原生质体再生方案。
建立有效的原生质体再生和...
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