图1。Fibrokey™测定法的视觉表示。500µL的尿液通过AssayMap Bravo上的蛋白质脱盐板过滤。然后使用胰蛋白酶在同一自动化平台上降低,烷基化并消化浓缩蛋白。如果可用,则在尿液过滤之前将重标记的蛋白质标准标准(n = 14)峰值。或者,在酶促消化之前,将含有胰蛋白酶标签的重型标记肽被峰值。胰蛋白酶肽使用XEVO TQ绝对三倍四极质质谱仪与配备的Acerity Premier LC耦合,该LC配备了Accarity HSS T3柱(1.6μm,1mm x 150mm),以100μl/min的流速和总运行时间为15分钟,每样品的总运行时间为15分钟。使用计划的MRM方法和每个肽至少2个MRM过渡,监测每个目标蛋白的独特肽和相应的同位素标记的内部标准。使用Targetlynx软件处理色谱图。每个肽的最激烈过渡用于绝对定量。使用Inoviv的专有工作流进行了分析验证和统计分析。在每个患者样品中也运行肌酐测定法和总蛋白质测定法,以允许数据归一化。
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