1。使用砂浆和杵用液氮将粉末磨粉样品磨成细粉。有关样本中断的详细信息,请参阅第5页。2。将多达25毫克的组织粉转移到新的1.5 ml微量离心管中。注意:对于具有较高细胞数量(例如肝脏或脾脏)的组织样品,将样品输入降低至10 mg。 3。加入200 µL GL1缓冲液和20 µL蛋白酶K溶液。涡流混合。4。将样品在60°C孵育3小时/过夜。偶尔将管子倒转。5。在14,000 x g处离心2分钟,到颗粒不溶性碎片。6。将上清液转移到新的1.5 mL微输出管中。7。加入200 µL GL2缓冲液。涡流混合。8。添加4 µL RNase A溶液。涡旋在室温下混合并孵育5分钟。
将色谱柱放入干净的微量离心管中。将30-50µL洗脱缓冲液,TE缓冲液或无菌水直接加到柱膜上,并站立2分钟。对于大于8KB的DNA片段,在65°C -70°C下使用预热的洗脱缓冲液,以提高洗脱效率。在10,000 x g处离心1分钟以洗脱DNA。将DNA存储在4°C或-20°C下。对于较高的产率,在50µL中洗脱DNA,为更高的浓度,以较小体积的DNA(即:30µL)洗脱DNA。但是,产量将略有降低。确保洗脱缓冲液直接分配到膜的中心,以完全洗脱。te缓冲液也可以洗脱DNA。如果用水用于洗脱DNA,则最大洗脱效率在PH7.0和8.5之间。将DNA存储在-20°C时,DNA可能在没有缓冲剂的情况下会降解。
用于样品制备•8管条(Thermo Fisher Scientific,Cat。编号ab0264)或其他不含核酸酶的PCR级管条,固定在PCR架中,或已验证的96孔板,这些板已验证以与您的FACS仪器一起使用•Microplate Film(USA Scientific,Cat。编号2920-0010)用于分类之前的密封管/板•铝单选项卡箔封封(美国科学,猫。编号2938-4100)或帽条(Thermo Fisher Scientific,Cat。编号ab0784/ab0850)•用于96孔板或管条的低速台式离心机•合适的容器中的干冰,用于闪光灯冷冻电池•(可选的)BD FACS PRACES PRACES PRACES PRES pre-SORT SORT SORT BUFFER(BD BISCIENCES,BD BISCIENCES,CAT。编号563503)•(可选)智能seq ht套件裂解组件(cat。编号634439)或10x裂解缓冲液(Takara Bio,Cat。编号635013)用于排序额外的板
7。样品冷却至4°C后,停止程序。在板旋转器中离心板,以在井中收集冷凝器,然后将板放在冰上。继续进行第2节,或在≤-20°C下存放板以供以后使用。如果没有板振动器,则可以将1个PCR反应混合在一起。2建议实时热环体,因为它可以启用所有井的库库,如附录A所示。如果不需要定量,则可以使用非定量系统。3如果未使用实时PCR,放大后进行了几个样品以及阳性对照的PCR清理。对Tapestation®进行分析以确认正确的扩增子大小(〜606 bp)。4 PCR程序用于42个周期,因此从阴性对照中看到一些扩增是正常的。负面对照应与其他样品一起测序。如果适合您的项目,则可以从分析中减去负面控制的分类单元。
职位:KENPHIA II 卫星医学实验室技术员 地点:现场卫星移动实验室(根据全国各地定义的现场工作区域)。 报告给:KENPHIA II 卫星医学实验室团队负责人 职位数:42 持续时间:6-9 个月 总体职责 接收样本并输入实验室数据管理系统 (LDMS),将样本处理成干血斑 (DBS),并离心全血以获得血浆等分试样以运往中央检测实验室。 为 KENPHIA II 现场样本提供检测服务,即 CD4 检测和 GeneXpert POCT 或 DNA PCR(EID)。 与现场团队联络开展卫星实验室活动,以实施 KENPHIA II 调查的实验室组件。 他/她将根据需要履行各种职责,以成功履行该职位的职能,包括但不限于以下技术活动。 职责
• 8 联管(Thermo Fisher Scientific,目录号 AB0264)或其他无核酸酶、PCR 级联管(固定在 PCR 架中)或 96 孔板(已验证可与您的 FACS 仪器配合使用) • 微孔板膜(USA Scientific,目录号 2920-0010),用于在分选前密封管/板 • 铝制单片箔密封(USA Scientific,目录号 2938-4100)或盖条(Thermo Fisher Scientific,目录号 AB0784/AB0850),用于在分选后密封管/板 • 用于 96 孔板或联管的低速台式离心机 • 适合容器中的干冰,用于快速冷冻细胞 • (可选)BD FACS 预分选缓冲液(BD Biosciences,目录号 563503) • (可选)SMART-Seq HT Kit 裂解组分(Takara Bio,目录号 634439)或 10X 裂解缓冲液(Takara Bio,目录号 635013)用于对额外的板进行分类
• 8 联管(Thermo Fisher Scientific,目录号 AB0264)或其他无核酸酶、PCR 级联管(固定在 PCR 架中)或 96 孔板(已验证可与您的 FACS 仪器配合使用) • 微孔板膜(USA Scientific,目录号 2920-0010),用于在分选前密封管/板 • 铝制单片箔密封(USA Scientific,目录号 2938-4100)或盖条(Thermo Fisher Scientific,目录号 AB0784/AB0850),用于在分选后密封管/板 • 用于 96 孔板或联管的低速台式离心机 • 适合容器中的干冰,用于快速冷冻细胞 • (可选)BD FACS 预分选缓冲液(BD Biosciences,目录号 563503) • (可选)SMART-Seq HT Kit 裂解组分(货号 634439)或 10X 裂解缓冲液(Takara Bio,货号 635013)用于对额外的板进行分类
从Lipografter®系统中表征脂肪酸的脂肪酸盐过量的脂肪酸盐被置于无菌50ml离心管中,并运送到MTF生物制剂以进行表征。在1倍磷酸盐缓冲盐水(PBS)中洗涤脂肪酸2-3次,直到组织颜色为淡黄色。添加了涉及0.1%胶原酶型IA溶液(Sigma-Aldrich Inc.,GA)的修改隔离方案2后,添加了一个修改的隔离方案2,并在37ºC的水浴中孵育2小时(在搅拌下)。消化后,组织显得光滑,胶原酶消化被相等的维护培养基灭活,由DMEM/F12,10%胎牛血清(FBS)和1%青霉素/链霉菌素/链霉菌素(Fisher Scientific,PA)组成。然后将溶液离心以收集SVF颗粒。然后将SVF颗粒重悬于氯化铵溶液中,并在室温下孵育10分钟,以帮助裂解红细胞。最后,将溶液离心以隔离
•DNA大小 - 能够恢复基因组和线粒体DNA尺寸片段˃50kb。如果存在,也将回收寄生,微生物和病毒DNA。•DNA产量 - 色谱柱的DNA结合能力为125 µg。通常,哺乳动物组织产生:每毫克骨骼,心脏,肺和脑组织1-3 µg DNA,每毫克肝脏和肾脏3-5 µg DNA。人类全血将产生3-7 µg DNA,每100 µL取样。•洗脱体积 - DNA可以洗脱至200 µL DNA洗脱缓冲液或水。•设备 - 水浴或热块(55°C),离心机或真空源和歧管,微离心,涡流,圆锥管(15 - 50 mL)和微量离心管。•DNA应用 - 使用Quick -DNA™MidiPrep Plus套件分离的DNA可用于生命科学研究(例如下一代SEQ。),基因分型,牲畜育种,兽医研究和常规应用测试。
专用设备:• PM-560 – Patriot PAC-2 前体测试、飞行模拟、故障排除和重新认证。用于导引头测试/验证的消声室,在 MDAGS 级别进行高级故障排除•控制部分测试装置 - 控制部分的飞行模拟测试和重新认证。液压/气动系统• SAD/ESAD 测试 – 确保设备安全性并可验证安全与解除武装 (S&A) 装置和电子安全与解除武装装置 (ESAD) 的可用性•现场电阻测试装置 - 对全能 PAC-2 的所有变体进行现场测试,以确保发射筒和导弹连接之间的连续性并验证导弹是否处于安全状态。便携式,可在世界任何地方使用•惯性传感器组件测试套件 - 用于陀螺仪/加速度计测试的氛围(环境)、加热器、离心机•现代化的地狱火通用测试套件 - 根据需要测试全弹导弹的导引头、激光和氮气供给控制部分测试•现代化的半主动激光导引头测试套件 - 地狱火导弹的先进导引头部分测试