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线粒体减少氨基氧霉素的成分1 p。 ...
缩写：165t，位于165位的苏氨酸（突变体）； A165，位于165位的丙氨酸（野生型）； AAV，腺相关病毒； ACTB，β-肌动蛋白； Alt，丙氨酸氨基转移酶； AST，天冬氨酸氨基转移酶； ATF6，激活转录因子6； CHX，环己酰亚胺； CQ，氯喹； DBEQ，Dibenzylquinazoline-2,4-二胺； ECL，增强的化学发光； ERAD，内质网相关降解； FACL4，脂肪酸-COA连接酶4; GCKR，葡萄糖酶调节剂； GWAS，全基因组协会研究； HMARC1，人线粒体减少的组件1； IP，免疫沉淀； IRE1，内切核酸酶肌醇提高酶1； ITR，反向终端重复；妈妈，线粒体相关的膜； MARC1，线粒体减少氨基氧霉素的成分1； MASLD，代谢功能障碍相关的脂肪分裂肝病； Mboat7，包含7的膜结合的O-酰基转移酶结构域； MMARC1，小鼠线粒体减少的成分1； ORO，油红色O染色； PERK，蛋白激酶R样性内质网（ER）激酶； PNPLA3，含patatin样磷脂酶结构域的蛋白3； RTA，相对总丰度； Ru，相对单位； SD，标准偏差； SDS，十二烷基硫酸钠； SDS-PAGE，十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳； SEM，平均值的标准误差； TM6SF2，跨膜6超家族成员2; UBC，泛素C; UBE2E1，泛素结合酶E2-E1; UBE3EC，泛素蛋白连接酶E3C; UPR，展开的蛋白质反应； UPS，泛素介导的蛋白酶体（降解）系统； VCP，含勇气的蛋白质。
BTK和CIAP1蛋白质降解器三元复合物的快照和合奏
杂功能嵌合降解器是一类配体，它们募集靶蛋白到E3泛素连接酶以驱动化合物依赖性蛋白质降解。对作用机理至关重要的是靶，降解器和E3连接酶之间形成三元复合物，以促进泛素化和随后的降解。然而，存在对三元复合物结构的有限见解，包括几乎没有对最广泛选择的E3，凋亡1的细胞抑制剂的研究（CIAP1）。我们的结果揭示了独特的三元复合结构的见解，并表明增加的三元复合稳定性/刚度不一定总是与提高的降解效率相关。
新英格兰生物实验室分析证书
产品名称：T4 DNA 连接酶 产品编号：M0202S 浓度：400,000 U/ml 单位定义：一个单位定义为在 20 µl 总反应体积中，16°C 下 30 分钟内使 6 µg Lambda-HindIII DNA 连接率达到 50% 所需的酶量。 包装批号：10270901 有效期：01/2027 存储温度：-20°C 存储条件：10 mM Tris-HCl、50 mM KCl、1 mM DTT、0.1 mM EDTA、50 % 甘油，（pH 7.4 @ 25°C） 规格版本：PS-M0202S/L v1.0
MYCBP2 的功能丧失变异导致神经行为表型和胼胝体缺陷
胼胝体是连接大脑两个半球的一束轴突纤维。以胼胝体发育不良为核心表型的神经发育障碍为了解轴突发育异常导致的病理学提供了宝贵的窗口。本文描述了一组八名患有神经发育障碍的患者，这些患者的特点是一系列缺陷，包括胼胝体异常、发育迟缓、智力障碍、癫痫和自闭症特征。每位患者都携带 MYCBP2 的一个独特的新生变异，MYCBP2 基因编码一种非典型 RING 泛素连接酶和信号传导中枢，在轴突发育中具有进化保守的功能。我们利用 CRISPR/Cas9 基因编辑将疾病相关变异引入秀丽隐杆线虫 MYCBP2 直系同源物 RPM-1 的保守残基中，并评估了体内功能结果。与 MYCBP2 变异患者的不同表型一致，携带 rpm-1 中相应人类突变的秀丽隐杆线虫表现出轴突和行为异常，包括习惯改变。此外，影响 RPM-1 泛素连接酶活性的变异中发生了自噬标记物 LGG-1/LC3 的异常轴突积累。解剖学、细胞生物学和行为读数的功能遗传结果表明，MYCBP2 变异可能会导致功能丧失。总的来说，我们从多名人类患者和在体动物模型上进行 CRISPR 基因编辑的结果支持了 MYCBP2 与人类神经发育谱系障碍之间的直接联系，我们称之为 MYCBP2 相关发育迟缓伴有胼胝体缺陷 (MDCD)。
研究文章在种子衰老中累积的基因组损害导致植物基因组不稳定性和生长抑制
成功的发芽和幼苗建立是自然环境中作物产量和植物生存的重要决定因素。发芽势受到次优环境条件的损害，这些环境条件会导致种子老化和高水平的基因组损伤。然而，在随后的幼苗生长上积累的DNA损伤的诱变和生长抑制潜力在很大程度上是未知的。拟南芥种子在染色体断裂修复因子DNA连接酶4和DNA连接酶6中表现出对自然衰老的影响的超敏反应，相对于野生型种子，发芽活力和幼苗生物量降低。在这里，我们确定陈旧的拟南芥种子在根生组织中显示出较高的程序性细胞死亡（PCD）水平，该拟南芥持续到幼苗建立中，在DNA双链断裂中表现出较高的细胞死亡。报告基线确定了种子老化对突变水平和肉体内重组频率的影响。种子恶化导致萌发幼苗的移码突变和基因组不稳定性的水平显着升高。因此，在植物生命周期的种子阶段产生的升高水平的基因组损伤可能对植物的随后发育产生显着影响。此外，种子老化的诱变作用可能对植物种群和生态系统的基因组稳定性具有长期影响。总体上，我们确定了在次优质量种子对随后的植物生长和基因组稳定性的影响中累积的基因组损害，这对农作物产量和植物生存的影响有相关的影响。
APC/C-CDH1靶向底物作为阿尔茨海默氏病的潜在疗法
阿尔茨海默氏病（AD）是最普遍的神经退行性疾病，也是老年痴呆症的主要原因。这种疾病对个人及其家人产生了很大的影响，代表了日益增长的公共卫生和社会经济负担。尽管如此，没有有效的治疗选择可以治愈或改变疾病进展，从而强调了确定新的治疗靶标的必要性。突触功能障碍和丧失是阿尔茨海默氏病的早期病理特征，与认知能力下降相关，并随着神经元死亡而进行。在过去几年中，E3泛素连接酶后期促进复合物/循环体（APC/C）已成为突触可塑性和神经元存活的关键调节剂。到此末端，连接酶结合了其大脑中的主要激活剂CDH1。然而，促进复合物/循环体-CDH1复合物的灭活剂触发了树突破坏，突触损失和神经变性，从而导致记忆和学习障碍。有趣的是，与阿尔茨海默氏病的发作和进展有关的寡聚淀粉样蛋白β（Aβ）肽会诱导CDH1磷酸化，从而导致后期促进复合/环形体CDH1复合物复合物隔离和灭活。这会导致几种后期的异常积累，促进复合物/旋风cdh1靶标在阿尔茨海默氏病损坏的地区，包括Rock2和Cyclin b1。在这里，我们回顾了后期促进复合物/循环体 - CDH1失调在阿尔茨海默氏病发病机理中的功能，在其分子靶标引起的神经毒性中特别注意。了解后期促进复合物/循环体CDH1靶向底物在阿尔茨海默氏病中的作用可能有助于开发这种神经系统疾病的新有效疾病改良治疗。
CBX4通过抑制＆
E3 Sumo蛋白连接酶CBX4（CBX4）是PolyComb-抑制复合物1（PRC1）的关键组成部分，据报道调节与肿瘤生长，转移和血管生成有关的多种基因。然而，其在T细胞介导的抗肿瘤免疫中的作用仍然难以捉摸。为了阐明这个问题，我们生成了用CBX4的T细胞特异性缺失的小鼠。敲除小鼠的肿瘤生长增加。此外，它们的肿瘤锻炼淋巴细胞表现出受损的肿瘤坏死因子-Alpha（TNF-A）和干扰素 - 伽马（IFN-C）的产生，其程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）水平升高。实际上，在基因敲除小鼠的所有主要的外围T细胞的主要子集中观察到了失调的PDCD1表达，响应于T细胞受体（TCR）刺激，敲除小鼠的所有主要子集都伴有功能缺陷。在支持CBX4和PD-1之间的直接联系时，CBX4过表达导致PDCD1表达的下调。表观遗传分析表明，CBX4的缺乏会导致PDCD1启动子的抑制性组蛋白修饰的积累减少（H3K27me3）。此外，抑制多孔抑制复合物1（PRC1）的E3连接酶活性或多孔反向反应复合物2（PRC2）的甲基转移酶活性恢复了CBX4转染的细胞中的PDCD1表达。累积地，这项研究揭示了CBX4在调节T细胞功能中的新功能，并扩展了我们对PDCD1表达的表观遗传控制的理解。
IDT 无缝克隆方法协议 (RUO22 ... - NET
无缝克隆方法 [ 1 ] 是传统限制性位点克隆的绝佳替代方案，其优势在于只需单管反应，即可在短短 30 分钟内无缝组装多个片段（图 1）。此方法包括 Gibson Assembly 和 Golden Gate，可实现定向克隆，无需特定的限制序列。无缝克隆依赖于使用由嗜温外切酶、嗜热连接酶和高保真聚合酶组成的酶混合物。由于组装需要两端都有完整的序列，因此该方法可以筛选出截短的序列或末端有错误的序列。我们建议在组装和大多数克隆应用中使用无缝克隆方法。
抽象演示编号2850
•NX-5948在4（DC 50 = 0.16 nm）和24小时（DC 50 = 0.03 nm）时促进WT BTK的有效降解•获得的抵抗突变减少或废除抗抗增殖物的抗增殖性，以抑制BTK抑制剂的抗抑制作用，并抑制btk的抑制作用，以抑制btk的抑制作用，以抑制btk的抑制作用，以抑制btk的活动。增殖。活性位点中的单个氨基酸变化通常足以显着降低目标占用率。•与以占用驱动的药理学相比，靶向蛋白质降解器采用事件驱动的药理学，诱导具有E3连接酶的三元络合物来促进靶标泛素化。此外，靶蛋白与E3连接酶之间的其他相互作用可以提高三元络合物相对于二进制复合物的稳定性。•NX-5948诱导BTK和CRBN之间的正合作关系，并保留了降解C481S，V416L，T474I和L528W突变体BTK的能力，无论观察到的NX-5948对V4116L和L5528的二进制结合亲和力丧失。•NX-5948显示出与已发表的BTK降解器相比，新型BTKI抗性突变的覆盖范围，特别是在T474i和V416L突变的背景下。•抑制剂和降解器对TMD8细胞上CD86表达的下调与NX-5948的抗增殖作用密切相关。•NX-5948下调突变体TMD8细胞上的CD86表达，并保留抑制具有C481S，V416L，T474I和L528W突变的细胞增殖的能力•NX-5948在蛋白质组学评估中高度选择性地选择了BTK降解；在原代T细胞，TMD8细胞，NX-5948治疗的MM-1R细胞中未鉴定出明显的直接外靶标•NX-5948的1A/B期试验正在进行复发或难治性B细胞恶性肿瘤的患者（NCT05131022）。