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接头是化学合成的双链DNA寡核苷酸，其中包含一个或多个限制位点，以通过限制酶进行切割，例如eco ri，Hind III，BAM HI等。通过使用DNA连接酶将接头与钝的端DNA连接。载体和DNA均用限制酶处理以形成粘性末端（图2.3）。交错的切割，即然后用T4 DNA连接酶与矢量的末端和重组质粒DNA分子结扎，然后用T4 DNA连接酶结扎粘性末端。此过程的限制是外国DNA可以在内部部位切割。Hind III
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