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化学修饰的 AsCas12a 向导 RNA 可改善不同组织中脂质纳米颗粒介导的体内基因编辑
（Cytiva）。LNP 货物是编码工程 AsCas12a 核酸酶和 gRNA 的 mRNA，重量比为 1:1。通过 RiboGreen 测定法（ThermoFisher Scientific）评估 LNP 的包封率大于 80%，多分散性指数 (PDI) <0.2，通过 Zetasizer 分析（Malvern Panalytical，型号 ZSU3205）评估平均直径大小 <105 nm。• 细胞培养处理：用指定浓度的包封 AsCas12a mRNA 的 LNP 处理细胞，并在转染后 72 小时分离 gDNA。原代人肝细胞 (PHH) 的转染包括重组人载脂蛋白 E。进行基于扩增子的下一代测序 (NGS) 以确定编辑百分比。 • 小鼠眼内体内编辑：通过前房内注射将 LNP 递送至每只 hMYOC Y437H（具有 Y437H 突变的人类肌动蛋白基因）敲入小鼠的一只眼中。注射后一周，解剖眼球，从前房分离 mRNA。采用基于转录本的 RT-ddPCR 检测来测量剩余 hMYOC mRNA 的程度。 • 小鼠肝脏内体内编辑：通过尾静脉静脉注射将 LNP 递送至 hMYOC Y437H 小鼠。注射后一周，解剖肝脏，分离 gDNA，并进行基于扩增子的 NGS 以确定编辑百分比。 • 体外结合亲和力测量：将标记的未修饰的向导与重组工程 AsCas12a 和浓度不断增加的修饰“测试”向导混合，在室温下孵育 3 小时，然后在硝酸纤维素印迹膜 (Cytiva) 和 Hybond N+ 膜 (Cytiva) 上进行双重过滤分离。在每个膜上定量荧光标记的未修饰向导，并计算结合的未修饰向导的百分比。标记的未修饰向导的结合百分比降低是由于来自修饰的“测试”向导的结合竞争。
脂质纳米颗粒有效地提供了基本编辑器ABE8E，以进行col7a1校正，以疾病性表皮溶液bullosa成纤维细胞Invitro
到编辑脂质纳米颗粒（LNP）已被广泛批准，并在全球范围内用于传递mRNA。lnps可以包装并传递mRNA编码的基因编辑器，包括腺嘌呤碱基编辑器，它们将T碱基对转换为无需双重DNA断裂或供体DNA的G C C碱基对（Gaudelli等，2017）。腺嘌呤基本编辑器是一种潜在的治疗方法，用于遗传性疾病营养不良的表皮溶液Bullosa（DEB）。deb是由COL7A1的致病变异引起的，导致功能障碍或不存在VII型胶原蛋白（C7），这是固定纤维的主要组成部分，它们粘附了皮肤E表皮连接，从而使皮肤稳定性（Bardhan等，2020）。目前无法治愈DEB；然而，W 90％的Col7a1变体是单核苷酸变体，c> t单核苷酸变体可用于W 60％的变体（Clinvar数据库； 2023年8月访问）。这些变体是由腺嘌呤碱基编辑器定位的；我们的小组和其他人已经证明了腺嘌呤基本编辑器在恢复病原变体和恢复C7表达方面的实用性（Osborn等，2020; Sheriff等，2022）。在这项研究中，我们首先探讨了新型LNP的使用，以mRNA格式传递ABE8E（Richter等，2020），其单一指定RNA（SGRNA）针对致病性C.5047 c> t col7aa1 col7a1 col7a1变体在患者锻造的纸张中
通过靶向 LXR 信号的表面工程脂质纳米粒子增强 CAR 巨噬细胞的胞吐作用
清除死亡细胞或胞吞作用是解决炎症不可或缺的一部分。然而，动脉粥样硬化斑块的炎症微环境经常影响凋亡细胞和驻留吞噬细胞的生物学，导致胞吞作用功能障碍。为了解决这个问题，开发了一种嵌合抗原受体 (CAR) 巨噬细胞，它可以靶向和吞噬表达 CD47 的抗吞噬凋亡细胞。在正常和炎症情况下，CAR 巨噬细胞表现出相当于抗体阻断的活性。CAR 巨噬细胞的表面用针对肝脏 X 受体通路的活性氧 (ROS) 响应性治疗性纳米颗粒进行修饰，以提高其细胞效应活性。CAR 和纳米颗粒工程激活脂质通量泵的结合增强了细胞碎片清除并减少了炎症。进一步表明，未分化的 CAR-M 可以在微制造的血管系统内迁移。研究还表明，我们的 CAR 巨噬细胞可以充当嵌合开关受体 (CSR)，以抵抗免疫抑制炎症环境。开发的平台有可能为下一代心血管疾病疗法的进步做出贡献，进一步的研究包括体内实验。
脂质纳米颗粒用于RNA递送
在非病毒载体中，脂质纳米摩析被认为是递送RNA thera peutics的金标准。脂质纳米颗粒在RNA递送中的成功，并批准了三种用于人使用的产品，已激发了对不同病理学的RNA疗法的进一步研究。这需要解码病理的细胞内过程并将输送系统定制到目标组织和细胞。脂质纳米分离器形态的复杂性源于脂质成分的组装，可以通过各种能够驱动纳米颗粒与所需组织的纳米颗粒形成的方法引起的脂质成分。在其他情况下，可以将预成型的纳米颗粒与RNA混合，以诱导自组装和结构重新构造成RNA负载的纳米颗粒。在这篇综述中，最相关的脂质纳米传动器及其RNA传递的潜力是根据组装机理和粒子结构描述的。
脂质纳米粒子的物理化学趋向性和亲和性部分靶向性相结合可增强器官靶向性
摘要：目前已出现两种将纳米粒子靶向特定器官和细胞类型的方法：亲和部分靶向和物理化学趋向性。在这里，我们直接比较和结合使用旨在靶向肺部的静脉 (IV) 脂质纳米粒子 (LNP)。我们利用 PECAM 抗体作为亲和部分，利用阳离子脂质作为物理化学趋向性。这些方法产生的肺摄取量几乎相同，但 aPECAM LNP 显示出更高的内皮特异性。结合这些靶向方法的 LNP 的肺摄取量比单独使用任何一种方法高 2 倍以上，并且显著增强了上皮摄取量。为了确定肺部吸收是否是因为肺部是静脉注射下游的第一个器官，我们比较了静脉注射和颈动脉内 (IA) 注射，发现 IA 联合靶向 LNP 在首过器官大脑中达到每克注射剂量的 35% (%ID/g)，是报道中最高的。因此，结合亲和部分和物理化学策略可提供单独任何一种靶向方法都无法实现的好处。关键词：肝外递送、物理化学、抗体介导、肺靶向、细胞类型表达
斑马鱼胚胎的脂质转染
斑马鱼是发育和生物医学研究中广泛使用的模型生物，具有体外受精、胚胎透明和与人类遗传相似等优点。然而，将外源遗传物质引入斑马鱼胚胎的传统方法，尤其是显微注射，带来了巨大的技术挑战并限制了通量。为了解决这个问题，我们开发了一种新方法，利用 Lipofectamine LTX 通过脂质转染将核酸有效地递送到斑马鱼胚胎中。我们的方案绕过了显微注射的需要，提供了一种经济高效、高通量且用户友好的替代方案。该方案概述了斑马鱼基因递送的新策略，以提高该模型系统中遗传研究的效率和范围。
探索脂质纳米颗粒与粘液在健康和囊性纤维化条件下相互作用的机制
粘液是人类肺部的第一道防线，因此会阻碍治疗药物有效递送至下层上皮。对于无法轻易突破粘膜屏障的基因载体（例如基于 CRISPR 的基因编辑工具）而言，情况尤其如此。尽管脂质纳米颗粒 (LNP) 已成为一种多功能非病毒基因递送系统，可以帮助克服递送难题，但仍存在许多知识空白，尤其是对于囊性纤维化 (CF) 等疾病状态。本研究通过利用实验方法和布朗动力学 (BD) 模拟评估基因载体、粘蛋白唾液酸化、粘蛋白浓度、离子强度、pH 值和聚乙二醇 (PEG) 浓度和性质对 LNP 扩散率的影响，为健康和疾病状态下 Cas9 mRNA 或核糖核蛋白负载的 LNP-粘液相互作用提供了基本见解。综上所述，本研究确定了关键的粘液和 LNP 特征，这些特征对于实现合理的 LNP 设计以进行粘膜输送至关重要。
脂质管理的寿命途径2024
1-英格兰的心血管疾病野心4 2-脂质管理的生命周期方法2024 5 3-此途径中使用的一系列脂质疗法的概述7 4-儿童病例案例发现算法9 5-儿童审查和治疗算法的儿童审查和治疗算法，用于已知或暂停的案例案例，发现了案例10 6- FH的案例，发现了诊断和尤为诊断，诊断诊断，初级预防的脂质疗法14 8-当Qrisk®3可能低估风险时，当人们已经很高的风险15 9-良好的患者决策辅助CVD风险16 10-何时考虑从75岁以上的初级预防脂质疗法，从75年以上的初级预防疗法18 11-慢性病和脂质疾病的疾病预防疗法和脂质疾病的疾病评估19 12-使用CVD ATCVD AT CHRISC®3-QRISCRICT®3-QRISCSIAD（QIAIA）（QIAIA）（QIAIA）3）脂质专业诊所21 14-疾病摘要要考虑一种量身定制的脂质疗法22 15- GSF预后指标23 16-生活方式修改的摘要24 17-健康饮食以降低CVD的风险24 18-推荐体育锻炼的摘要25 19-对吸烟对胆固醇的影响25 20-降低胆固醇2222222222222222222.
神经酸合成底物是介导的脂质补充的必不可少的成分，以进行更有效的中枢神经系统再生
摘要：中枢神经系统（CNS）损伤导致严重的神经功能障碍，作为神经元细胞死亡和轴突变性的重复。，在成熟的中枢神经系统中，神经元几乎无法再生其轴突并重建神经丧失，脱髓鞘是神经系统疾病（例如多发性硬化症（MS））的标志之一。不幸的是，作为一种重新恢复过程，雷梅尔通常不足以防止轴突丢失并改善脱髓鞘后的神经缺陷。目前，仍然没有有效的治疗工具来恢复神经功能，但有趣的是，新兴研究证明了脂质补充剂在人体各种病理过程中的有益作用。将来，可用的对中枢神经系统再生有益作用的可用脂质可能包括在支持疗法中，但该主题仍然需要进一步研究。基于我们和其他人的研究，我们回顾了外源脂质的作用，指出了在雷梅尔的过程中至关重要的底物，但在可用的研究中被省略了，证明了人类饮食中脂质的适当供应作为CNS再生期间的支持性治疗。
