酵母人工染色体(YAC)为隔离和映射哺乳动物染色体的区域提供了强大的工具。,我们通过通过同源重组将救援质粒插入YAC载体中的DNA片段开发了一种快速有效的方法来分离代表YAC克隆极端的DNA片段。构建了两个救援载体,其中包含一个酵母Lys2可选基因,一个细菌的复制起源,一个抗生素耐药基因,一个包含多个限制位点的聚链链接和与PYAC4载体同源的片段。“终端克隆”程序涉及将救援载体转化为带有YAC克隆的酵母细胞,然后制备酵母DNA并转化为细菌细胞。所得质粒的长度最高20 kb,可用作杂交探针,作为直接DNA测序的模板,以及作为荧光原位杂交绘制的探针。这些向量适合从使用PYAC衍生载体构建的任何YAC中拯救端键。我们通过从人类YAC图书馆中拯救Yac-end片段来证明这些质粒的实用性。
抽象的酵母人工染色体克隆是一种用于基因组映射研究的有吸引力的技术,因为很大的DNA片段可以很容易地传播。然而,详细的分析通常需要广泛的印迹杂交技术的应用,因为人工铬的通常仅以每个单倍体基因组的拷贝形式存在。我们已经开发了一个克隆载体和宿主菌株,通过允许人工染色体的副本数量来减轻此问题。矢量包括一个conter粒粒料,可以通过更改碳源来打开或关闭。可以通过选择异源性胸苷激酶基因的表达来实现强大的人工染色体副本的强选择性压力。使用此系统时,大小约100至600千碱基的人造染色体很容易被放大10至20倍。选择性条件并未在测试的任何克隆中引起明显的后栅格。在放大的人造染色体克隆中的丝粒重新激活,从而稳定地维持了20代拷贝数。拷贝数控制在人造染色体分析的各个方面的应用。
分离染色体的流式细胞术是细胞遗传学的一种新方法,可快速测量单个中期染色体。在这种方法中,用适当的荧光染料染色的水悬浮液中的染色体被限制在激发染料的窄激光束中高速流动。发射的荧光通过光度法测量,累积的数据形成染色体荧光的频率分布。该频率分布的峰值归因于单个染色体或具有相似荧光的染色体组;峰值平均值与染色体荧光成正比,峰值面积与染色体出现频率成正比。因此,频率分布可作为核型(1、2)。此外,流式分选可根据染色体的染色特性分离染色体(3、4),这与传统的中期染色体纯化方法不同,后者依赖于速度或等密度沉降、区域离心或选择性过滤(5)。纯化单个中期染色体很重要,原因如下。富集或纯染色体部分已进行生化分析,以提供有关 DNA 或蛋白质结构的信息(6),将遗传信息转移到整个细胞(7-9),或通过体外杂交绘制基因图谱(10)。但一般来说,传统技术无法提供足够纯度的染色体,无法进行高分辨率生物或生化研究。通过基于溴化乙锭荧光的流式分选,我们以 90% 的纯度将雄性鹿 Muntiocus muntjak (2n = 7) (4) 的每个染色体和中国仓鼠 M3-1 细胞系的 14 种染色体类型分离成 8 个染色体组 (1, 3)。在我们之前对溴化乙锭染色的人类染色体的研究中,我们仅从雄性 (2n = 46) 的 24 种染色体类型中分辨出 8 个染色体组 (2, 3)。在本研究中,使用 DNA 荧光染料 33258 Hoechst 和改进的仪器,
摘要我们已经从人类2,C8.1和C29B的两个等位基因组宇宙中鉴定出了两个等位基因组宇宙,每个粘液均包含两个脊椎动物端粒重复的倒置阵列,并在头对头排列,5'(ttaggg), - (ccctaa), - (ccctaa),3'。序列fln g这个端粒重复是当今人类序列的特征。BAL-31核酸酶实验人造人造染色体的克隆和荧光原位杂交的荧光表明,这些倒置重复的序列均与2 Q13和不同但重叠的人类染色体末端的子集杂交。我们得出的结论是,克隆在宇宙中C8.1和C29B中的基因座是古老的端粒融合的遗物,标志着两个祖先猿染色体融合产生人类染色体的点。
人类和黑猩猩的基因组相似度高达99%。HARs占据了这1%差异的很大一部分,这可能导致培养皿中人类和黑猩猩的神经元呈现出截然不同的结果。人类神经元长出了多个神经突,这些神经突是帮助神经细胞发送和接收信号的细长突起。但黑猩猩的神经元只长出了单个神经突。当人类HARs被植入人工黑猩猩神经元后,黑猩猩的神经元长出了更多这样的神经突。
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在识别分子机器(包括折叠有丝分裂染色体的冷凝剂和拓扑异构酶)方面取得了巨大进展。通过环挤出产生染色质环路的发现彻底改变了染色体折叠的领域。要了解这些机器如何用适当的尺寸折叠染色体,同时解散姐妹染色单体,需要确定如何调节和部署它们。在这里,我们概述了当前对这些机器和因素如何通过细胞周期依赖性表达,染色质定位,激活和非活性来调节,通过翻译后修改以及通过与其他因素以及染色质模板本身相互关联。仍然有许多关于如何调节冷凝剂和拓扑异构酶的开放疑问,但考虑到染色体折叠式折叠型的速度,似乎在未来几年中,其中许多可能会得到回答。
1 Childhood Genetic Diseases, Sorbonne University, Inserm, Armand-Trousseau Hospital, Paris, F-75012, France 2 Genomic Medicine Service, Public Assistance Hospitals de Paris (AP-HP), University of Paris, Cochin Hospital, Paris, F-75014, France 3 Service of Oto-Rhin-Laryngology and Cervico-Facial Surgery, AP-HP, Bicêtre Le Kremlin-Bicêtre医院,F-94270,法国4 Institut Mondor de Recherche Biomedique,Paris-Paris-Es-Créteil大学,INSERM U955,CNRS ERL7240,Hénri-Mondor Hospital,Créteil,France france france for Persir forsir forsir forsir forsity persisy for Persir persiration persir persirice crame,crénri-bord Hospital,france for persir cumpiritiation pessir, AP-HP,Sorbonne University,Armand-Trousseau医院,巴黎,F-75012,法国6儿科,Chu Grenoble Alpes,Grenoble,Grenoble,F-38500,F-38500,F-38500,7肺气学和儿科过敏症服务法国克雷特尔市CréteilIntermunal医院中心,法国94000,9分子遗传学,AP-HP,AP-HP,Armand-Trousseau医院,巴黎,F-75012,巴黎10号,巴黎10染色体遗传学,AP-HP,AP-HP,Trousseau,Trousseau医院,巴黎,HONT HOSTER CERMENT,FRASE HOSTER SURM SUUN SUUN Surry Surry intercortial Surrim intercorter Intercorment Intercorment Interri criri-cerrim criri surry-criri-criri-criri-criri incer intercrien incrigh克雷特尔(Créteil),克雷特尔(Créteil),F-94000,法国
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科恩和他的同事最初认为章鱼可能具有与鸟类和蝴蝶类似的性别决定系统,其中雄性为 ZZ,雌性为 ZW。(生物学家给出了性别决定系统,其中雄性使用不同的字母拥有两个相同的性染色体,以避免与雌性拥有两个相同染色体的 XX/XY 系统混淆。)
