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工程蛋白必须在适当的生理环境下根据表型进行选择才能发挥作用。在这里,我们提出了一种通用方法,该方法允许在稳定条件下以每个细胞单一变体的方式在细胞质或亚细胞区室中生成表达多样化异源蛋白库的哺乳动物细胞组。为此,我们采用 CRISPR/Cas9 编辑技术来原位多样化目标蛋白的靶向片段。我们通过原位工程和溶酶体内特异性选择一种具有极强 pH 抗性的长斯托克斯位移红色荧光蛋白变体来证明该方法的实用性。根据哺乳动物细胞亚区室或细胞器的特定条件定制特性可以成为优化各种蛋白质、基于蛋白质的工具和生物传感器以实现不同功能的重要手段。

靶向原位蛋白质多样化和内部

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