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新型基因编辑技术中使用的核酸酶主要有四类,分别是:巨核酸酶、锌指核酸酶(ZFN);转录激活因子样效应核酸酶 (TALEN);以及成簇的规律间隔的短回文重复序列 (CRISPR) 相关 (Cas) (Gaj 等人,2016)。巨核酸酶是一种在特定区域切割 DNA 的内切核酸酶,可识别大于 12 bp(碱基对)的序列。 LAGLIDADG 巨核酸酶家族包含 I-CreI 和 I-SceI,它们是第一种用于基因编辑的酶。由于只有少数氨基酸残基与核苷酸接触,这些酶被设计用于在特定位点切割基因(Paques;Duchateau,2007)。此外,ZFN 是一种人工酶,也是最早用于诱导植物靶向突变的酶之一。这些酶是由锌指型结构域和限制性酶 Fok I 的结构域融合产生的。与基因编辑中使用的其他核酸酶一样,ZFN 会在需要修复的 DNA 特定位置插入双链断裂 (DSB),并且由于修复机制中的故障,可能会出现突变 (Carroll, 2011)。使用该系统的主要问题是这种酶的高毒性,以及它会产生许多脱靶效应(Cornu et al., 2008; Ramirez et al., 2008),这会损害不应改变功能的基因的功能(Zhang et al., 2015)。随着版本的合并

CRISPR技术在植物基因组编辑中的应用

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