机构名称：
¥ 5.0
SARS-COV-2大流行强调了对研究体液免疫反应并鉴定具有诊断性和治疗潜力的单克隆抗体（MAB）的迫切需求。记忆B细胞（MBC），对自适应免疫的关键，在抗原重新接合时会产生高亲和力抗体。虽然单细胞高通量测序已彻底改变了抗体曲目研究，但它具有关键的局限性：无法同时确定抗原结合特异性和免疫球蛋白基因序列，并且高资源需求限制了低回能设置中可访问性的限制。在这里，我们提出了一个具有成本效益的单细胞培养（SCC）平台，可以对人类MBC曲目进行全面分析，包括表位特异性响应，交叉反应性研究和MAB分离。使用SARS-COV-2康复和疫苗接种样品，我们优化了使用NB21馈线细胞，R848和IL-2刺激的MBC SCC，与散装培养物相比，具有高克隆效率和30倍富集的抗原特异性MBC。在592个孤立的mAb中，有52.7％的人对武汉菌株尖峰蛋白表现出特异性，靶向受体结合结构域（RBD）的27.9％，15.4％的N末端结构域（NTD）和56.7％的其他区域，可能是S2域。比较分析显示出不同的交叉反应性模式：所有抗尖峰mAB中有40.5％识别所有经过测试过的SARS-COV-2变体（Wuhan，Beta，Delta，Gamma和Omicron Ba.2），而29.6％的人仅显示四个变体，不包括Omicron Ba.2，仅显示了四个变体的认可；还鉴定出56个单应力反应性mAb（14.9％）。所需的克隆以进行重组单键产生。值得注意的是，所有筛选和中和测定都直接用培养上清液进行，从而消除了对大规模测序和转染的需求。SCC平台还启用了无偏的免疫球蛋白曲目分析，揭示了收敛的V区域重排，包括公共V3-30和V3-53/V3/V3-66抗体与先前的SARS-COV-2研究一致。在伪病毒中和测定中验证了两个具有广泛中和潜力的公共靶向克隆。这个简化的平台在7天之内提供了同时提供抗原特异性的MAB隔离，V区域测序和功能研究，从而赋予低资源环境中的研究人员能够解决全球健康不平等，并增强对未来大流程学的准备。
快速隔离广泛中和mab
主要关键词
相关文件推荐
