Prime editing 是一种基于 CRISPR 的“搜索和替换”技术,可在没有双链断裂 (DSB) 或供体 DNA 模板 1 的情况下,在哺乳动物细胞中介导靶向 32 插入、删除和所有可能的碱基对碱基转换。Prime editing 34 酶 (PE2) 由与工程逆转录酶 (RT) 融合的 SpCas9 切口酶组成。35 PE2 通过 Prime editing 向导 RNA (pegRNA) 被招募到目标位点,该 RNA 除了标准基因组靶向间隔区和 SpCas9 结合发夹结构外,还包含 3' 序列,37 该序列充当融合 RT 的模板,以在一条切口 DNA 链上合成编程的 DNA 序列。当细胞 DNA 修复机制修复断裂的链时,这种 RT-39 延伸片段会与未编辑的片段竞争,而编辑后的序列有时会取代基因组中的原始序列 1,2。41