外源 DNA 可以作为精确编辑细胞基因组的模板。然而,将体外产生的 DNA 输送到靶细胞可能效率低下,模板 DNA 的低丰度可能是精确编辑率低的原因。在细胞内产生模板 DNA 的一个潜在工具是逆转录子,这是一种参与噬菌体防御的细菌逆转录元件。然而,很少有人致力于优化逆转录子以产生设计序列。在这里,我们确定了逆转录子非编码 RNA 的修饰,这些修饰会产生更丰富的逆转录 DNA。通过测试能够实现高效逆转录的逆转录子操纵子架构,我们发现 DNA 产量的提高可以从原核细胞移植到真核细胞,从而实现更高效的基因组编辑。最后,我们表明逆转录子 RT-DNA 可用于精确编辑培养的人类细胞。这些实验为使用逆转录子产生 DNA 进行基因组修饰提供了一个通用框架。