(◀图 4) B. 与 pHrodo 染料结合的双环和转铁蛋白与细胞一起孵育 18 小时,并在 Incucyte 上进行分析。C. 和 D. 将 HT1080 细胞接种过夜。将细胞在无血清培养基中孵育 60 分钟,温度为 37 °C。对于 D. 细胞在 37 °C 下用载体 (0.1% DMSO) 或 Dyngo 4a (30 µM) 预处理 30 分钟。然后将细胞与结合的双环 (1.0 µM;红色) 在 4 °C 下孵育 1 小时。然后将细胞转移到 37 °C 下 1.5 分钟以进行内吞。洗涤后,在 -20 °C 下用 80% 丙酮固定和透化细胞 10 分钟。然后将细胞在 10% 山羊血清中封闭 1 小时,并用一抗 (指示) 标记。然后用二抗(绿色)和 Hoechst(蓝色)清洗细胞并标记。三重培养孔的代表性图像。放大 40 倍。(▲ 图 5)A. 和 B. 新鲜分离的人类近端曲小管细胞接种在 transwell 插入物中,Bicycles 测试浓度为 10μM。通过质谱法测量极化细胞的跨上皮吸收和分泌通量。结果标准化为基线 FITC 标记的转铁蛋白摄取(AB 和 BA)。测量单层完整性(80-120 Ω.cm 2 跨上皮电阻)作为质量控制。