机构名称：
¥ 1.0
CRISPR-Cas9 技术被广泛用于精确和特异性地编辑酿酒酵母基因组，以获得无标记的工程宿主。靶向双链断裂由向导 RNA (gRNA) 控制，该 RNA 包含用于 Cas9 结合的结构片段和与基因组 DNA 靶标杂交的 20 碱基引导序列。将 20 碱基引导序列引入 gRNA 表达载体通常需要复杂、耗时和/或昂贵的克隆程序。我们提出了一种用于酿酒酵母 CRISPR-Cas9 基因组编辑的新质粒，pCEC-red。该工具可以（i）在单个质粒中将 Cas9 和 gRNA 表达盒转化酵母，（ii）借助 Golden Gate Assembly 将 20 碱基序列高效插入质粒，以及（iii）进行基于染色质的筛选以加快选择正确的质粒。我们通过靶向 ADE2 基因测试了 pCEC-red 的基因组编辑效率。我们选择了三个不同的 20 碱基靶标并设计了两种类型的修复片段来测试 pCEC-red 的精确编辑和大型 DNA 区域替换程序。我们获得了两种工程程序的高效率（∼ 90%），表明 pCEC 系统可用于快速、可靠的无标记基因组编辑。
pCEC红色
主要关键词
相关文件推荐
