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使用下面的引物模板(表 1),片段 2 可以通过 PCR 扩增(图 4A)。我们建议使用 gRNA NIA TLS1/2 作为 PCR 模板。“NNNNNNNNNNNNNNNNNNNN”(表 1)代表应由 gRNA 靶序列替换的核苷酸。用于创建 NIA1 靶向片段 2 的引物列于下方作为示例(表 1)——这些引物用于创建 gRNA NIA TLS1/2。引物还在片段末端添加了 BsaI 切割位点(图 4A),这些位点与 gRNA 片段 1 TLS1/2 中的双 BsaI 位点兼容。
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