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通过CRISPR – CAS系统进行的自然原核防御需要在称为适应的过程中将间隔者整合到CRISPR are中。为了搜索具有增强能力的适应蛋白,我们建立了一个永久性的DNA PAC Kaging和Transing(P EDP AT)系统,该系统使用T7 pha ge的菌株将pha ge to packa ge质粒构成,然后将其转移并杀死宿主,然后使用T7噬菌体的不同应变来重复该周期。我们使用PED-PAT来识别更好的适应蛋白 - – Cas1和cas2 - 通过富集具有更高适应性效率的突变体。我们识别出在体内增强的10倍增强的cas1蛋白。在体外,一个突变体具有较高的积分和DNA结合活性,与野生型CAS1相比,另一个突变体具有较高的分解活性。最后,我们结婚说,他们选择的特定座位可降低原始图案。在技术上使用的P EDP或型号屏幕,需要有效,轻松的DNA转导。

强大的富集技术揭示了高度活跃的CRIS PR适应蛋白

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