注意:确保将 Cas9 蛋白作为反应中的最后一种材料添加。如果进行了敲除编辑,则无需添加 HDRT。表中 Cas9 与 sgRNA 的比例为 1:3。强烈建议对每个设计进行 Cas9:sgRNA 比例以及 Cas9 蛋白和 HDRT 的量进行实验优化。GenScript 建议通过测试 1:1 和 1:4 之间的 RNP 比例开始优化。ssDNA 或 dsDNA 的量可以分别最初设置在 1 μ g - 4 μ g 或 0.2 μ g - 1 μ g 之间(对于 0.5 kb 和 4 kb 之间的 HDRT;如果 HDRT 长度超出此范围,则需要相应调整试剂量)。最好为第一次实验设置阴性对照、阳性对照和转染对照。