用途:EpiNext™ CUT&RUN Fast Kit 旨在从低输入细胞/染色质中快速富集与蛋白质(组蛋白或转录因子)复合的特定 DNA,并通过下一代测序使用 Illumina 平台或 qPCR 等其他方法识别或绘制体内蛋白质-DNA 相互作用。该试剂盒的创新工作原理、优化的协议和组件允许在最小化非特异性背景水平的情况下捕获目标蛋白质/DNA 复合物。捕获的 DNA 特别适合构建非条形码(单重)和条形码(多重)文库,以更少的偏差和更高的分辨率绘制目标蛋白质-DNA 相互作用区域。输入量:对于细胞,通常,每个反应的量可以是 2 x 10 3 到 2 x 10 5 个细胞。为了获得最佳制备效果,细胞输入量应为 1 x 10 5 ,尽管从 EpiNext™ CUT&RUN Fast Kit 获得的修饰组蛋白测序数据只需 500 个细胞即可获得。对于从细胞或组织中分离的染色质,每个反应的量可以是 0.1 µg 至 5 µg 的染色质。为了获得最佳制备效果,染色质输入量应为 2 µg。起始材料:起始材料可以包括各种哺乳动物细胞样本,例如来自烧瓶或培养皿的培养细胞、原代细胞或从血液、体液、新鲜/冷冻组织(预制备的染色质)中分离的稀有细胞群,以及从整个细胞群和胚胎细胞中分选出的特定细胞等。抗体:抗体应为 ChIP 级,以便识别与 DNA 或其他蛋白质结合的蛋白质。如果您使用的抗体尚未经过 ChIP 验证,则应使用适当的对照抗体(例如抗 RNA 聚合酶 II、抗 H3K4me3 或抗 H3K27me3)来证明抗体适用于 ChIP。内部对照:此试剂盒中提供了阴性和阳性 ChIP 对照。注意事项:为避免交叉污染,请小心地将样品或溶液移入 PCR 管中。使用气溶胶屏障移液器吸头,并在液体转移之间始终更换移液器吸头。整个过程中都要戴手套。如果手套和样品接触,请立即更换手套。
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