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在本研究中,我们描述了敲除标记基因 MAR1 的建立,用于在组织培养中选择 CRISPR/Cas9 编辑的拟南芥幼苗和番茄外植体。MAR1 编码一种位于线粒体和叶绿体中并参与铁稳态的转运蛋白。它还会随机将氨基糖苷类抗生素转运到这些细胞器中,而该基因的缺陷会导致植物对这些化合物不敏感。在这里,我们展示了由 CRISPR 系统诱导的 MAR1 突变使拟南芥植物和番茄组织具有卡那霉素抗性。MAR1 在多种植物物种中都是单拷贝的,相应的蛋白质形成一个独特的系统发育进化枝,从而可以轻松识别不同植物中的 MAR1 直系同源物。我们证明,在多重方法中,通过由 MAR1 突变介导的 CRISPR/Cas9 诱导的卡那霉素抗性来选择拟南芥幼苗,观察到第二个靶基因突变的频率高于仅因存在转基因而选择的对照群体。这种所谓的共同选择以前从未在植物中发生过。该技术可用于选择经过编辑的植物,如果编辑事件很少发生,这可能特别有用。

植物中 CRISPR 诱导突变的选择

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