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CRISPR 原核防御系统 (Barrangou et al , 2007; Jinek et al , 2012) 的发现及其转化为有效且高效的基因组工程机制 (Cong et al , 2013; Mali et al , 2013; Ran et al , 2013) 的发现彻底改变了功能基因组学。CRISPR 技术依赖于将 RNA 引导的核酸内切酶靶向基因组内的特定序列位置。该系统已用于各种基因组修饰策略,包括基因敲除(通过错误修复断裂)和定点诱变(通过提高同源性定向修复的效率,在靠近断裂的基因组区域整合 DNA 模板)。在大多数应用中,将核酸酶准确靶向基因组位点比酶活性的特定核苷酸位置优先。虽然核酸酶工程化推动了该系统可支持的技术多样化(Pickar-Oliver & Gersbach,2019),但控制核酸酶靶向的分子规则保持不变;基因组地址编码在向导 RNA 序列 (gRNA) 中,该序列定义为位于原间隔区相邻基序 (PAM) 之前的 20 个核苷酸的基因组 DNA 片段。有大量的生物信息学工具可用

CRISPR-TAPE:以蛋白质为中心的 CRISPR 引导设计,用于靶向蛋白质组工程

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