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线粒体在细胞能量生产和代谢中起着核心作用。执行这些功能所需的大多数蛋白质是在细胞质中合成的,并进口到线粒体中。线粒体功能障碍引起的越来越多的代谢性疾病可以追溯到线粒体蛋白导入的错误。通常使用进口到纯化的线粒体中的放射性标记的前体蛋白来研究前体蛋白的进口机制。在这里,我们建立了基于荧光的进口测定法,以分析蛋白质进口到线粒体中。我们表明,荧光标记的前体可以使进口分析具有与使用射线活性前体的敏感性相似的敏感性,但它们提供了用picomole分辨率量化导入的优势。我们将导入测定法调整为96台板格式,以允许以筛选兼容格式进行快速分析。此外,我们表明荧光标记的前体可用于监测纯化的线粒体中F 1 F 0 ATP合酶的组装。因此,我们提供了一种基于敏感的荧光进口测定法,可以实现定量和快速的进口分析。

基于定量荧光的方法研究线粒体蛋白进口

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