位于小鼠大脑皮层中的原生质星形胶质细胞(PRA)紧密并置,在成人阶段形成了明显连续的三维基质。到目前为止,没有免疫染色策略可以将它们单一单一的策略和在成熟动物和皮质生成过程中的形态进行分割。皮质PRA起源于背胸膜中的祖细胞,可以轻松地使用整合载体的子宫电穿孔来靶向。这里提出了一项方案,该方案将这些细胞用可抑制基因组融合的颜色(魔术)标记策略标记,该策略依赖于PiggyBac/ tol2换位和CRE/ LOX重组以随机表达明显的荧光蛋白(蓝色,氰基,黄色和红色),以特定于特异性的亚细胞界面。这种多色命运映射策略使在胶片发生开始之前与颜色标记物的结合可以标记附近的皮质祖细胞,并跟踪其后代,包括星形胶质细胞,从胚胎到各个细胞水平的成人阶段。半parse标记通过调整电穿孔矢量的浓度和颜色对比度的浓度,该颜色可通过多种基因组整合的颜色标记(魔术标记或MM)提供,使星体胶质细胞个性化并将其领土和复杂的形态单一单一单一单一单独化。是一个全面的实验工作流程,包括电穿孔程序的详细信息,通过共聚焦显微镜进行多通道图像堆栈以及计算机辅助的三维分割,这将使实验者能够评估单个PRA的体积和形态。总而言之,魔术标记的电穿孔提供了一种方便的方法,可以单独标记许多星形胶质细胞并在不同的发育阶段访问其解剖特征。该技术对于分析各种小鼠模型中的皮质星形胶质细胞形态特性将是有用的,而无需诉诸于具有转基因报告基因的复杂杂交。
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