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人类基因组内特定位点的异常微卫星重复扩增会导致几种不同的、可遗传的、主要为神经系统的疾病。由于细菌载体中此类重复的不稳定性，尤其是大量重复扩增，因此创建这些疾病的模型是一项挑战。设计用于更精确的基因组工程项目（例如工程敲入小鼠）的构造体被证明是一项更大的挑战，因为这些不稳定的重复需要大量的克隆步骤才能引入同源臂或选择盒。在这里，我们报告了我们在 C9orf72 基因中克隆大型六核苷酸重复的努力，该基因源自 BAC 构造体，源自 C9orf72 -ALS 患者。我们提供了详细的方法，用于有效确定细菌中的重复大小和生长条件，以促进生长和亚培养期间的重复保留。我们报告说，亚克隆到线性载体中可显著提高稳定性，但取决于 DNA 复制通过重复的相对方向，这与之前的研究一致。我们设想这里提出的研究结果将提供一种相对简单的途径来维持大范围的微卫星重复扩增，从而有效地克隆到载体中。
基因靶向构建体的尺寸确定、稳定性和克隆重复扩增
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