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摘要：哺乳动物细胞不断受到各种 DNA 损伤事件的影响，从而导致 DNA 修复途径的激活。了解 DNA 损伤反应的分子机制有助于开发针对这些途径元素的治疗方法。双链断裂 (DSB) 对细胞活力和基因组稳定性特别有害。通常，使用 DNA 损伤剂（例如电离辐射或基因毒性药物）研究 DSB 修复。这些会在难以控制损伤剂量的非预测基因组位点处引起随机损伤。此类干预不适合研究特定 DSB 位点如何根据局部染色质状态调用不同的 DNA 损伤识别和修复途径。RNA 引导的 Cas9（CRISPR 相关蛋白 9）核酸内切酶是介导靶向基因组改变的强大工具。基于 Cas9 的基因组干预是通过在感兴趣的基因组区域形成 DSB 来实现的。在这里，我们利用基于计算机预测的定制设计的混杂向导 RNA，在人类基因组的特定数量和位置诱导 DSB。这是通过重组 Cas9-向导复合物的电穿孔实现的，它提供了一种通用、低成本且快速的方法，用于在细胞培养模型中诱导受控 DNA 损伤。
使用 CRISPR 的有针对性的、可调节的 DNA 损伤工具......
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