金黄色葡萄球菌CAS 9(SACAS 9)是RNA引导的内核ASE,其靶向与原始探针相邻的互补DNA相邻的邻接基序(PAM)进行裂解。其小尺寸促进了体内递送的各种生物体基因组编辑。在此,使用单分子和集合方法,我们系统地研究了SACAS 9与DNA相互作用的基础机理。我们发现SACAS 9的DNA结合和裂解需要分别与指导RNA的PAM -Proximal DNA的6-和18 -bp。这些活性是由三元复合物之间的两个稳定的相互作用介导的,其中一种稳定的相互作用位于PAM的大约6 bp,而不是DNA上Sacas 9的明显足迹。值得注意的是,原始间隔物内部的另一个相互作用显着强,因此构成了DNA结合的SACAS 9持续块对DNA跟踪电动机。有趣的是,在裂解后,萨卡斯9自主释放了pAM-DESTAL DNA,同时保持与PAM的结合。这种部分DNA释放立即废除了其与原始探针DNA的强烈相互作用,因此促进了其随后与PAM的解离。总体而言,这些数据提供了对SACAS 9的动态理解,并指导其有效的应用。
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