机构名称：
¥ 1.0
分子超分辨率显微镜（Chen等，2015），Geneti Cally用SNAP-TAG（一种突变的人O 6-烷基鸟嘌呤-DNA-烷基转移酶）标记了SOD1，可以用各种合成探测器将其共价标记（Keppler et al。通过两轮CRISPR-CAS9介导的同源性建议，获得了遗传修饰的H1 HESC纯合子克隆（H1_SOD1-SNAP）。在三氨基 - 酸 - 酸 - 链接中，将SNAP基因插入了SOD1编码区的C末端（图1 a）。H1 HESC与单个诱导RNA（SGRNA）-CAS9 PLAS MIDS和含有质粒的重组供体共转染。挑选了在分裂克隆中出现的并进行筛选以进行快照插入。首先获得了由一个快照敲入等位基因组成的杂合子克隆，并进行了第二轮CRISPR-CAS9诱导的SNAP敲击。然后，我们成功地产生了通过基因分型PCR，Sanger测序和Southern blot分析确认的纯合子快照敲入克隆（图1 B，补充。 图 1和补充。 图 2）。 通过使用抗SNAP和抗SOD1抗体进行免疫印迹证实了SOD1-SNAP融合蛋白在敲门细胞裂解物中的表达（图1 B，补充。图1和补充。图2）。通过使用抗SNAP和抗SOD1抗体进行免疫印迹证实了SOD1-SNAP融合蛋白在敲门细胞裂解物中的表达（图1 F和补充。图4）。大多数SOD1-SNAP蛋白在敲击细胞裂解物中保持完整，仅几乎无法检测到的未标记的SOD1信号水平，这可能源自裂解（图1 f）。与H1亲本细胞中的内源SOD1水平相比，总体SOD1-SNAP蛋白水平降低了，这表明TAG
干细胞研究-Chen Lab-休斯顿大学
主要关键词
相关文件推荐
