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使用放射性的体外IM端口测定法对线粒体进口进行了研究。前体蛋白是合成的,并在网状细胞裂解物中进行[35s]标记。在OP Timum缓冲液和温度条件下与纯化的线粒体合作,使前体可以越过线粒体包膜,然后蛋白酶处理后,蛋白酶处理会消化任何UNIM端口蛋白。可以通过破坏膜电位来研究终点反应和阴性对照。可以使用页面解决样本,并通过放射自显影可视化。这种提供动力学分辨率的敏感技术使我们能够了解蛋白质反式的位置。使用昂贵和受限的放射性,定量信息不足以及高通量的低调是显着的限制。
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