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胞嘧啶碱基编辑器 (CBE) 能够在目标基因座上实现有效的胞嘧啶到胸苷 (C-to-T) 替换，而不会造成双链断裂。然而，目前的 CBE 会编辑其活动窗口内的所有 C，从而产生不良的旁观者突变。在最具挑战性的情况下，当旁观者 C 与目标 C 相邻时，现有的碱基编辑器无法区分它们并编辑两个 C。为了提高 CBE 的精度，我们识别并设计了人类 APOBEC3G (A3G) 脱氨酶；当与 Cas9 切口酶融合时，所得的 A3G-BE 会在人类细胞中对 5′-CC-3′ 基序中的第二个 C 进行选择性编辑。我们的 A3G-BE 可以高精度地安装单个与疾病相关的 C-to-T 替换。与 BE4max 相比，完美修饰等位基因的百分比在疾病校正方面高出 6000 倍以上，在疾病建模方面高出 600 倍以上。基于双细胞胚胎注射方法和 RNA 测序分析，我们的 A3G-BE 表现出最小的基因组和转录组范围的脱靶效应，实现了高靶向保真度。
使用工程化的 APOBEC3G 进行单个 C 到 T 替换...
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