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分子生物学工具能够定制蛋白质，并完全控制序列、纯化标签、分泌信号和其他性能特征。虽然工具的广泛性使研究人员能够创建他们所需的蛋白质，但这个过程通常涉及使用活细胞的低通量和耗时的数天工作流程。为了克服这些限制，我们展示了一种完全体外的工作流程，该工作流程结合了 Golden Gate DNA 组装、滚环扩增 (RCA) 和无细胞蛋白质表达 (CFPE)，可同时快速筛选多种蛋白质设计的影响（图 1，第 2 页）。该工作流程使研究人员能够使用一组基本的定制 DNA 载体或插入片段在短短一天内生成一系列蛋白质变体。它还提供了一种评估每种目标蛋白质独有的工程约束的方法，并允许快速识别可溶性蛋白质。
使用 NEBridge® Golden Gate 的快速 1 天工作流程...
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