摘要:迫切需要实施一种敏感和特定的护理(POC)生物传感器,该生物传感器解决了在资源约束环境中面临的工具限制和制造挑战。在本文中,我们关注的是肠热,这是低收入和中等收入国家的一种高度传染性和普遍的感染。尽管易于治疗,但其模棱两可的症状与缺乏快速,准确且负担得起的诊断相结合会导致不正确的治疗,从而加剧了疾病负担,包括增加抗生素耐药性。在这项研究中,我们为CRISPR-CAS12A开发了一个读出模块,该模块会产生比色的输出,可见肉眼可见,并且可以在基于反式裂解的任何CRISPR分析中充当级联信号放大器。我们通过固定与β-半乳糖苷酶(LACZ)酶相关的寡聚来实现这一目标,该酶在存在DNA靶向激活的CRISPR-CAS12A的情况下被切割。裂解后,将比色酶释放出来,并将上清液转移到包含X-gal的环境中,产生强烈的蓝色。该方法能够检测扩增的细菌基因组DNA,并且在删除对昂贵设备的需求的同时,对标准荧光测定的检测下限(LOD)具有下限。此外,冻干后它仍然活跃,允许在没有冷链的情况下运输的可能性,从而大大降低了部署成本。
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