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腺相关病毒(AAV)是基因治疗的强大载体;但是,使用AAV向量可能具有挑战性。每个构建体包含两个反向末端重复(ITR)序列,通常长145 bp,是感兴趣基因的侧面(图1)。ITR形成高度稳定的T形发夹,这对于病毒DNA 1的复制和封装至关重要。这些结构特征也会对传统克隆工作流造成严重破坏。自发缺失转移质粒的鼠疫DNA制剂,以及二级结构的形成确认性测序。因此,研究人员被双重打击:容易截断的AAV矢量,这些突变很难检测到。在这里,我们讨论了传播和验证AAV质粒的挑战,并展示了对工作流程的优化方法。
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