图1。Croft-seq的示意图。(a)具有gDNA(橙色)的链球菌Cas9的示意图,与距离dsDNA(绿色)结合,其中包含与NGG PAM序列(黄色)近端的错配(红色)。(b)Croft-Seq工作流的简化示意图。人类基因组DNA在用Cas9核酸酶消化之前用磷酸酶处理。将所得的DNA末端选择性地绑扎到生物素化衔接子上。然后除去适配器的过量,然后将连接的DNA富含磁珠富集。除去互补的非生物素化DNA链,并合成新的第二个DNA链。所得的DNA从珠子中释放出来,并通过PCR扩增进行测序。(c)Croft-seq生物信息学分析的工作流程。成对末端读数,测序和清洁残留适配器序列,首先与参考基因组保持一致。对齐的读数,该脚本使用4 bp读取窗口搜索陡峭的读取深度变化,并优先考虑潜在的脱离目标脱离靶向的读数和目标序列相似性的双向。只有靶向位置