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图2:与替代性DSB测序技术相比,诱导seq表现出无与伦比的灵敏度和动态范围。(a)诱导seq同时检测高度复发的诱导DSB和低级内源性DSB,并以高分辨率。基因组浏览器视图(IgV)诱导seq读取映射到HEK293T细胞的10MB部分,随后与限制性核酸内核酸内切酶Hindiii进行原位裂解。(顶部面板)高度复发性酶诱导的断裂表示在低分辨率(10MB,0-1000读物)时的绝大多数读数。(底部面板)高分辨率视图(粉红色的亮点,500kb,0-20读取)显示出未处理样品中存在的低水平的单源性断裂,以及在复发性印度诱导的突破(绿色亮点)中。(b)诱导seq读取的映射在Hindiii目标位点显示了断裂两侧的单核苷酸断裂映射的精度。(c)对经过治疗和对照样品的每个细胞测量的断裂定量。诱导seq在样品之间的3个数量级上定量检测到每个细胞的断裂。(d和e)通过酶Hindiii和ecorv检测体外裂解限制位点时诱导seq和dsbapture之间的比较。(d)使用诱导seq映射到测序和对齐基因组的读取和对齐基因组的比例更大。(e)使用少800倍的细胞,诱导seq鉴定了与DSBCAPTURE确定的ECORV(93.7%)相似的Hindiii限制位点(92.7%)。(f)使用诱导seq的诱导DSB检测的动态范围。除了在印度内目标序列(AAGCTT)上鉴定出的断裂外,还确定了多个1BP和2BP不匹配靶向位点。诱导seq测得的诱导的休息事件,跨越了8个数量级,从在印度内靶标地点确定的约1.5亿次断裂到最少频繁的脱离目标的5个断裂。(g)在检测ASISI诱导的活细胞中诱导的疾病,DSBCAPTURE和BLISS之间的比较。将测序的读取数(顶部面板)与每个实验(底部面板)识别的ASISI位点的数量进行了比较。诱导seq使用比DSBCAPTUE少的40倍读数检测到最大数量的ASISI位点,而读取的读数比Bliss少23倍。

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