用户友好的DNA工程方法可以实现多个PCR片段组件,核苷酸序列改变和定向克隆。靶DNA分子和克隆载体由PCR产生,而相邻片段之间具有6-10个同源性碱基。pCR引物包含一个二氧化神经菌残基(DU),该残基(DU)在同源性区域的3´末端,可以容纳核苷酸取代,插入和/或缺失。然后使用引物用离散的重叠片段扩增向量和靶DNA,这些片段在两端都包含DU。随后使用用户酶对PCR片段进行处理会在每个DU上产生一个单个核苷酸间隙,从而导致PCR片段侧翼,侧面有SS延伸,使定制DNA分子的无缝和方向组装成线性化的载体。多碎片组件和/或各种诱变变化。