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摘要 基于 CRISPR/Cas9 的基因敲除 (KO) 能够精确扰动人类细胞中的靶基因功能，理想情况下可以通过分子组学读数以无偏的方式进行评估。通常，这需要漫长的分离 KO 亚克隆的过程。我们在此表明，无论使用哪种向导 RNA，KO 亚克隆在表型上都是异质的。我们提出了一种实验策略，该策略可避免亚克隆并实现细胞池中快速有效的基因沉默，该策略基于两个向导 RNA 的协同组合，这些向导 RNA 位于基因组接近处（40-300 bp）。我们的策略可实现更可预测的插入/缺失生成，具有较低的等位基因异质性，同时残留靶蛋白表达较低或不可检测，这由 MS3 质谱蛋白质组学确定。我们的方法适用于非分裂原代细胞，也可用于研究必需基因。它能够生成仅反映目标消融表型的高置信度组学数据。
基于串联引导 RNA 的高效 CRISPR 策略...
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