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摘要:糖合成酶是突变的糖基水解酶,可以在受体糖酮/aglycone基团和活化的供体糖之间合成糖苷键,并具有合适的离开组(例如Azido,Fluoro)。但是,快速检测涉及偶氮糖作为供体糖的糖合酶反应产物的糖合酶反应产物一直具有挑战性。这限制了我们将合理工程和定向演化方法应用于快速筛选的能力,以改善能够合成定制聚糖的聚糖合成酶。在这里,我们概述了我们最近开发的筛查方法,用于使用模型的岩藻合成酶酶快速检测糖合酶活性,该酶设计为活性在岩藻糖基叠氮化物供体糖上。我们使用半随机和随机误差诱发诱变创建了一个多元化的建筑物联合组织突变体库,然后使用我们的小组开发的两种不同的筛选方法来鉴定了具有所需活性的相关的岩体合成酶突变体,以检测糖合酶的活性(即,通过检测在纤维蛋白酸盐反应后的同体形式上检测偶极外形); a)PCYN-GFP调节方法,b)单击化学方法。最后,我们提供了一些概念验证结果,说明了两种筛查方法的实用性,以快速检测涉及氮杂糖作为捐助者组的糖合酶反应的产物。

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