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建立人类疾病的非人灵长类动物模型对于开发治疗策略尤其是神经退行性疾病的治疗策略非常重要。普通狨猴作为一种新的实验动物模型引起了人们的关注,许多转基因狨猴都是通过慢病毒载体介导的转基因产生的。然而,慢病毒载体在转基因应用中的长度限制为 8 kb 以下。因此,本研究旨在优化 piggyBac 转座子介导的基因转移方法,其中将长度超过 8 kb 的转基因注射到狨猴胚胎的卵周隙中,然后进行电穿孔。我们构建了一个携带阿尔茨海默病基因的长 piggyBac 载体。使用小鼠胚胎检查了 piggyBac 转基因载体与 piggyBac 转座酶 mRNA 的最佳重量比。在注射 1000 ng 转基因和转座酶 mRNA 的胚胎中,70.7% 的胚胎干细胞确认转基因整合到基因组中。在这些条件下,将长转基因引入狨猴胚胎。转基因引入处理后,所有胚胎均存活,70% 的狨猴胚胎中检测到了转基因。本研究开发的转座子介导的基因转移方法可应用于非人类灵长类动物以及大型动物的遗传修饰。

piggyBac转座子介导的普通狨猴胚胎基因转移方法的优化

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