原肌球蛋白相关受体激酶 B (TrkB) 是脑源性神经营养因子 (BDNF) 的受体;其信号传导通过激活几个下游级联,有助于神经元存活、可塑性、分化和生长。缺乏细胞内激酶结构域的截短异构体 (TrkB.T1) 的过度表达与慢性疼痛的发展和持续有关。已发表的数据显示,小鼠模型中的 TrkB.T1 敲除可恢复运动功能并减轻脊髓损伤后的疼痛。我们项目的目标是确定抑制 TrkB.T1 表达的小分子作为慢性疼痛的潜在疗法,重点关注两种调节机制:(1) TrkB 前 mRNA 的差异转录后加工,以及 (2) 通过其 mRNA 的 3' 非翻译区 (3'UTR) 对 TrkB.T1 表达的转录后调节。对于第一点,我们假设两种主要 TrkB 亚型的比例主要受上游 (T1) pA 位点的切割和多聚腺苷酸化 (pA) 位点识别控制,因此抑制该位点 3'-加工的药物应能抑制 TrkB.T1 合成。对于第二点,我们假设 TrkB.T1 mRNA 3'UTR 包含调节序列,这些序列的功能可通过操纵关键反式因子的功能、表达或 RNA 结合活性的化合物进行调节,从而通过加速 TrkB.T1 mRNA 的衰变和/或抑制其翻译来抑制 TrkB.T1 的产生。对于每种机制,我们开发了独立的活细胞高通量筛选 (HTS) 检测方法,以识别可以 (1) 阻断 TrkB.T1 pA 位点的 3'-切割和多聚腺苷酸化,或 (2) 通过 TrkB.T1 mRNA 3'UTR 抑制基因表达的小分子。利用这些发现,我们旨在发现一种或多种能够抑制 TrKB.T1 表达的新药物,这些药物可在慢性疼痛的小鼠模型中作为新型镇痛药进行测试。
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