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摘要：基于 CRISPR（成簇的规律间隔的短回文重复序列）的技术是用于定点基因组修饰的强大、可编程工具。在成功改造并有效使用 CRISPR-Cas9 进行甲基营养酵母 Komagataella phaffii 的基因组工程后，人们希望有更多可用的核酸内切酶来增加实验灵活性，并在由于第三方的知识产权 (IPR) 而对工业研究有特定法律限制的情况下提供替代方案。MAD7 是一种工程化的 2 类 V 型 Cas 核酸酶，被推广为学术和工业研究的免版税替代品，由 Inscripta（美国加利福尼亚州普莱森顿）开发。本研究首次将CRISPR-MAD7用于K. phaffii基因组编辑，对编码甘油激酶1（GUT1）、红色荧光蛋白（DsRed）和zeocin抗性基因（Sh ble）的三个靶基因均获得了较高的基因编辑率（高达90%）。此外，还通过靶向K. phaffii中的259个激酶基因，系统地比较了CRISPR-MAD7和CRISPR-Cas9系统的基因组编辑效率。在这次大范围的测试中，与应用的CRISPR-MAD7工具箱（约23%）相比，CRISPR-Cas9具有更高的基因组编辑率，约为65%。
CRISPR-MAD7 和 CRISPR-Cas9 在 Komagataella phaffii 中基因破坏的比较
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