硫酸钠可以在DNA中脱氨酸“转化”胞嘧啶,但不会影响5-甲基胞霉素。Bisulfite对DNA的治疗是许多基于表观遗传学的研究的DNA甲基化分析的先决条件,这些研究涉及甲基化分析和甲基化状态的定量。然而,涉及甲硫酸硫酸含DNA的分析率通常由于DNA降解,不完整的转化率和/或低单位的DNA产量而导致可变性。我们已经系统地研究了硫酸氢盐治疗DNA的程序,特别注意该过程中涉及的化学物质并转化sion速率,以限制样品之间的变异性并改善常规方法。我们发现,可以改善常规的硫酸含量DNA转化化学化学液体,以使C到U转化效率的提高,而无需在高温和非生理学pH值下孵育反应混合物的DNA降解水平。对这一过程必不可少的是禁止在某些情况下发生的5-甲基胞嘧啶“过度转化”到尿嘧啶中。我们发现,可以简化硫酸盐转化过程,并通过将热变性与甲硫酸盐转化率耦合和使用柱内的脱硫偶联来清洁和纯化转换后的DNA,并通过将热量变性耦合到最低限度。这种新方法的平均得出的输入DNA平均恢复了> 99%C到U转换。这使其适用于FFPE和LCM衍生的样品,特别适合。该方法已被专门设计用于将(除了纯化的DNA)直接作为输入材料(除纯化的DNA)生物流体,细胞或组织。
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