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摘要 - 这项工作的目的是开发一种在大豆(Glycine Max)胚胎中创建和验证CRISPR-CAS系统和不同GRNA的方法。两个模型基因用于用一个GRNA或部分基因缺失的简单突变。通过使用经典限制酶克隆方法将启动子 + grna2插入CRISPR转换向量中,或通过将启动子 + GRNA2取代和插入启动子 + GRNA2。向量成功地构造了一个和两个grnas。大豆中的农杆菌介导的瞬时转化是为了测试GRNA和系统本身的质量(表达盒)。通过酶消化后DNA富集后转化的胚胎中检测到了简单的突变和基因缺失,然后是聚合酶链反应和测序,这表明CRISPR-CAS系统和指南在起作用。该方案可用于加速基于CRISPR的基因组编辑策略,用于大豆的遗传转化。

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