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神经退行性疾病的治疗方法仍然相当有限，包括额颞叶痴呆 (FTD) 和肌萎缩侧索硬化症 (ALS)，这强调了对更深入的机制洞察和疾病相关模型的需求。开发传统的敲除和转基因小鼠需要大量的时间和资金，这阻碍了我们开发遗传风险因素、疾病修饰剂和其他 FTD/ALS 相关靶点的新型疾病模型的能力。为了克服这些限制，我们生成了一种新型 CRISPRi 干扰 (CRISPRi) 敲入小鼠。CRISPRi 使用催化死亡形式的 Cas9，与转录阻遏物融合以敲低蛋白质表达，然后引入针对目的基因的单个引导 RNA。为了验证该模型的实用性，我们选择了 TAR DNA 结合蛋白 (TDP-43) 剪接靶点 stathmin-2 (STMN2)。由于 TDP-43 活性丧失，STMN2 RNA 在 FTD/ALS 中下调，并且 STMN2 缺失被认为在 ALS 发病机制中发挥作用。STMN2 功能丧失与 FTD 的关系尚未确定。我们发现与对照组相比，家族性 FTD 病例中的 STMN2 蛋白水平显著降低，这表明 STMN2 耗竭可能与 FTD 的发病机制有关。在这里，我们提供了概念证明，即我们可以同时敲低 Stmn2 并表达 9 号染色体开放阅读框 72 ( C9ORF72 ) 基因中的扩增重复序列，成功复制 C9 相关病理的特征。有趣的是，Stmn2 的耗竭对二肽重复蛋白 (DPR) 的表达或沉积没有影响，但显著减少了磷酸化 Tdp-43 (pTdp-43) 内含物的数量。我们认为，我们的新型 CRISPRi 小鼠提供了一种多功能且快速的方法来沉默体内基因表达，并提出该模型将有助于了解孤立基因的功能或在其他神经退行性疾病模型的背景下的基因功能。
CRISPR 干扰用于评估 C9ORF72 的修饰剂- ...
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